Старый знакомый – птичий грипп

« – Что вы скажете за кур, дорогой профессор? – крикнул Бронский… Он подчеркнул острым лакированным пальцем невероятной величины заголовок через всю страницу газеты: "Куриный мор в республике"». М. Булгаков «Роковые яйца»

Люди с давних времен знакомы с заболеванием, именованным в XIX в. «гриппом» (от франц. grippe – схватывать). Этот нежеланный спутник человечества не только собирает с него ежегодную дань в виде эпидемий, но служит также причиной массовой гибели птиц, заболеваний у свиней и лошадей, а иногда – даже у норок и морских млекопитающих

Вызывается грипп вирусами, относящимися к семейству ортомиксовирусов (Orthomyxoviridae): Influenzavirus A, Influenzavirus B и Influenzavirus C. Классифицированы они на основании так называемых антигенных различий в их белках, нуклеопротеидном и матричном. Напомним, что антигенами называются вещества, вызывающие иммунный ответ организма в виде образования специфических антител.

Вирусы типа В и С поражают только человека. Наиболее же патогенным считается вирус типа А, о котором и пойдет речь дальше. Именно он способен инфицировать разнообразные виды животных, периодически вызывая опустошительные пандемии в человеческой популяции. На основании двух разных гликопротеинов, располагающихся на поверхности вируса – гемагглютинина и нейраминидазы – вирус гриппа А подразделяют на так называемые субтипы. Всего известно 16 субтипов гемагглютинина и 9 субтипов нейраминидазы. Однако из 144 возможных пар комбинаций в природе встречаются только 86, и 83 из них найдены среди вирусов гриппа птиц, в то время как от млекопитающих были изолированы вирусы сравнительно немногих комбинаций субтипов. При этом только вирусы трех субтипов гемагглютинина (Н1, Н2 и Н3) и двух типов нейраминидазы (N1 и N2) широко циркулируют среди людей.

Природный резервуар

Вирус гриппа типа А, ставший ныне «модным» птичьим гриппом, был впервые выделен около 100 лет назад. Всего же начиная с 1961 г. в Северной Америке, Европе, Индии, Японии, Южной Африке и Австралии вирус был выделен, по крайней мере, у 90 видов – представителей 12 отрядов птиц. При этом в отряде Гусеобразных (Anseriformes) вирус был обнаружен более чем у четверти от 149 имеющихся видов, и в отряде Ржанкообразных (Charadriiformes) – примерно у 20 видов. Представители последнего отряда (цапли, ржанки, крачки) широко распространены по всему миру и отличаются склонно­стью к миграциям на далекие расстояния.

Таким образом, первичным резервуаром практически всех субтипов вируса гриппа А являются различные птицы, принадлежащие к отрядам Гусеобразных и Ржанкообразных. Прочие же виды, несомненно, не имеют столь большого значения в естественной истории вирусов гриппа, как эти перелетные птицы, ведущие водный и околоводный образ жизни.

В результате изучения генотипов вирусов гриппа у различных видов птиц выяснилось, что в Евразии и Америке они эволюционировали независимо. Таким образом, миграция между этими двумя континентами (широтная миграция), по-видимому, практически не играет роли в эволюции вируса гриппа, в то время как птицы, мигрирующие по долготе, вносят решающий вклад в этот процесс.

Новейшая история

Очевидно, что в течение столетий и тысячелетий вирус гриппа птиц «мирно» циркулировал в животном мире, являясь одним из факторов естественного отбора и регуляции численности. Однако с развитием сельского хозяйства и массового птицеводства перед ним, образно говоря, открылись «новые горизонты». Этому способствовали как неизбежная скученность домашней птицы, так и искусственная селекция, направленная на повышение продуктивности особей, что также неизбежно ведет к снижению их устойчивости. Однако долгое время проблема «птичьего гриппа» была предметом заботы лишь ученых-вирусологов, ветеринаров да зоотехников.

Все изменилось в 1997 г. с массовой эпизоотии «птичьего гриппа» в Гонконге, виновником которой явился вирус гриппа типа А Н5N1 серотипа. Это событие, вероятно, осталось бы не замеченным мировым сообществом. Однако, как выяснилось, этот же вирус стал виновником заболевания 18 человек, приведшего к летальному исходу у шести инфицированных. Един­ственным действенным оружием в борьбе с инфекцией, поразившей птицеводство Гонконга, стало полное уничтожение поголовья домашней птицы. Но джинн был уже выпущен из бутылки, и в последующие годы вирус гриппа Н5N1 стал распространяться по странам Юго-Восточной Азии и Китаю, нанося огромный экономический ущерб.

Следуя путями птичьих миграций, из Юго-Восточной Азии вирус вместе с перелетными птицами устремился осенью 2005 г. на Ближний Восток, в Северную Африку, на юг Европы. Так эпизоотия «птичьего гриппа» начала превращаться практически в «панзоотию», нанося урон птицеводству многих стран мира и, более того, начиная представлять угрозу здоровью людей. Мировая общественность и средства массовой информации во весь голос заговорили о пришествии новой «чумы» человечества.

Коварная «испанка» и гонконгский убийца

История с «птичьим гриппом» очередной раз свидетельствует в пользу истины, гласящей: если вы чего-то не знаете, это не означает, что этого «чего-то» не существует.

Все мы неоднократно в своей жизни сталкивались с заболеванием, которое врачи диагностируют как грипп. И, как сейчас установлено, чаще всего первоисточником этого заболевания у человека являются потомки тех самых вирусов «птичьих гриппов», которые прошли многолетнюю эволюцию в человеческой популяции, не раз вызывая эпидемии и пандемии.

Первой исторически зафиксированной пандемией явилась печально известная «испанка», чьим родоначальником был вирус «птичьего гриппа» Н1N1 и которая стала причиной гибели от 20 до 50 миллионов людей во всем мире. Множество людей погибло в течение первых дней заболевания и множество – в результате спровоцированных гриппом осложнений.

1957-1958 гг. «Азиатский грипп», унесший около миллиона человеческих жизней. Впервые зарегистрированный в феврале 1957 г., он всего за пять месяцев «покрыл» полмира, достигнув Американского континента.

1968-1969 гг. Последняя пандемия – «гонконгский грипп», и снова гибель около миллиона людей во всем мире. Вызвавший его серотип вируса H3N2 циркулирует в человеческой популяции до сих пор.

Все эти пандемии имели несколько общих особенностей. Так, первые вспышки заболеваний происходили в Юго-Восточной Азии. Появление вирусов Н2N2 и Н3N2 сопровождалось исчезновением из человеческой популяции вирусов гриппа, циркулировавших до них (подтипов Н1N1 и Н2N2, соответственно). Причина последнего явления остается неясной до сих пор.

Переходя от истории к новейшему времени, вернемся к уже упомянутой вспышке заболевания домашней птицы в Гонконге в 1997 г., сопровождавшейся инфицированием людей. Возраст заболевших колебался от 1 года до 60 лет, у всех них наблюдалась высокая температура, желудочно-кишечные расстройства, гепатит. Смерть шести заболевших произошла от первичной вирусной пневмонии.

И это были лишь «первые ласточки». Так, с 2003 г. на начало февраля 2006 г., по сообщению ВОЗ, в мире было официально зарегистрировано около 170 случаев заболевания «птичьим гриппом» среди людей при более чем 50 %-ном уровне смертности. Наибольшее число заболевших зафиксировано во Вьетнаме (93 человека), самая высокая смертность – в Камбодже и Индонезии.

Вакансия массового убийцы

События последних лет не могли не насторожить специалистов-гриппологов. Поскольку было установлено, что периодичность пандемий у людей составляет примерно 30-40 лет, то к концу прошлого столетия срок, как говорится, как раз подошел. Кто же является претендентом на звание нового «массового убийцы»?

Циркулирующие ранее в диких водоплавающих птицах как естественном резервуаре, низко патогенные подвиды вируса гриппа типа А Н5 и Н7 в последнее десятилетие заметно усилили свою патогенность как к природному хозяину, так и к другим видам птиц и млекопитающих. Обнаружено четыре новых варианта вируса, вызывавших гибель не только птиц, но и людей: H5N1, H9N2, H7N7 и H7N3. Наиболее же часто в последние десять лет встречается вирус гриппа Н5N1. Именно этот высокопатогенный азиатский вариант «птичьего гриппа» продолжает «осваивать» планету, широко распространяясь по всей Евразии и Северной Африке. Среди его жертв, помимо несметного числа домашней птицы, и жители этих стран.

Источником возбудителя инфекции, как правило, являются больные или погибшие от болезни домашние птицы, с которыми заболевшие находились в тесном контакте. Вместе с тем сообщается о случаях, когда заражение, возможно, происходило внутрисемейно, при уходе за больными. Следует иметь в виду также то, что долговременная циркуляция субтипа H5N1 в дикой птице может привести к широкому распространению вируса в водоемах, что представляет дополнительный потенциальный риск заражения для людей.

И все же – настолько сегодня велика вероятность возникновения очередной пандемии гриппа? Да, сейчас вирус «птичьего гриппа» стал более вирулентным и, в принципе, преодолел межвидовой барьер птица-человек. И все же пока он, по-видимому, не обладает способностью передаваться напрямую от человека к человеку и быстро распространяться среди популяции людей, что является необходимым условием для возникновения пандемии. Однако для последнего требуется лишь произвести «правильный» обмен генетическим материалом между, скажем, штаммом H5N1 и штаммом гриппа человека, что вполне может случиться, если человек или животное заболеет человеческим и птичьим гриппом одновременно.

Такое вирусное потомство теоретически может получить наследственные наборы, представляющие собой рекомбинации РНК-сегментов обоих родительских вирусов, которые обеспечат его эффективную передачу в человеческой популяции. Своеобразным «смешивающим сосудом» для образования нового пандемичного вируса могут стать обыкновенные домашние свиньи – наши ближайшие генетические и физиологические родственники. Пока этого, к счастью, не произошло, почему сегодня наиболее актуальными являются разработка и проведение в птицеводстве профилактических мероприятий по биобезопасности. Естественно, наряду с продолжением исследований экологии вируса в его естественном окружении.

На сибирских просторах

И все же – почему именно сибирские ученые, вирусологи и орнитологи, живущие и работающие отнюдь не в Юго-Восточной Азии, столь «близко к сердцу» приняли проблему «птичьего гриппа»? Все дело в том, что на юге Западной Сибири сходятся миграционные потоки птиц, зимующих в различных регионах мира – Европе, Африке, на Ближнем Востоке и в Средней Азии, Индостане и Юго-Восточной Азии. Щедро обводненные сибирские территории являются идеальным местом как для гнездования, так и для остановки в пути миллионам птиц.

Массовые миграции птиц протекают здесь с конца марта до первой половины июня и со второй половины июля почти до середины октября, благодаря чему на определенных участках лесостепи с весны до осени периодически наблюдаются массовые скопления птиц. Численность создающихся на время гнездования колоний водоплавающих и околоводных птиц может достигать нескольких тысяч особей. Все это обеспечивает особенно благоприятные условия для распространения различных вирусных и других заболеваний, опасных для человека.

Осенью дежурной темой разговоров становятся наступающие холода и эпидемия гриппа. Люди активно покупают «противогриппозные» средства, вакцинируются в тщетной надежде не заболеть или ускорить выздоровление. Приход тепла и весны мало что меняет – просто летом максимум заболеваемости смещается в южное полушарие. Несмотря на то, что грипп и гриппоподобные инфекции проходят самопроизвольно, у части больных возникают осложнения, протекающие не обязательно тяжело, но ввиду большого числа заболевших снимающие ежегодно большой урожай смертей. Обычно заболевает около 20 % населения, доля же погибших от числа заболевших составляет 0.04 %. Это немного при прогнозировании исхода отдельного случая, но впечатляет мировой масштаб: на 6 млрд. населения умирает более 500 тыс. человек!
В эпидемиях погибает больше. Во время «испанки» 1918 г. летальность предположительно составила 2-3 %. Если подобная пандемия повторится сегодня, погибнет около 70 млн. человек, причем в относительно короткие сроки – всего за полгода вирус может захватить весь мир и снять свой печальный урожай. Готово ли человечество к такому повороту событий? О тактике и стратегии борьбы с вероятной пандемией в следующих выпу­сках расскажет д.м.н. В. В. Власов, директор Российского отделения Североевропейского центра Кокрановского сотрудничества (Москва)

Начиная с 2002 г. Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» совместно с Институтом экологии и систематики СО РАН проводят мониторинг вируса «птичьего гриппа» у диких перелетных птиц, встречающихся на территории Новосибирской области. Для лабораторного исследования брались пробы как от живых птиц, пойманных сетями (смывы из клоакальной области), так и от птиц, отстреленных во время весенней и осенней охоты – в периоды массовой миграции.

В 30 из 1120 проб, собранных у диких птиц за период с 2002 г. по май 2005 г., обнаружены различные штаммы вируса гриппа, в том числе и высокопатогенного H5N1. Носителями потенциальной инфекции оказались, как и ожидалось, различные виды диких уток.

С осени 2003 г. наши ученые начали исследования циркуляции вируса гриппа у диких птиц и на сопредельных с Россией территориях – в Монголии. Но это лишь начало большой исследовательской работы. Взоры наших специалистов устремлены на сибирский Север – туда, куда на необъятные просторы от Таймыра до Берингова моря каждую весну из Африки, Европы, Азии, Америки и Австралии летят на гнездование десятки и сотни миллионов птиц и откуда новые варианты «птичьего гриппа» впоследствии разносятся практически по всему миру.

В публикации использованы фотографии А. Юрлова (ИСиЭЖ СО РАН, Новосибирск)

Актуальность проблемы острых респираторных заболеваний (ОРЗ) определяется наносимым ими существенным социально-экономическим ущербом, который обусловливают повсеместное распространение этой группы заболеваний, их высокая контагиозность, аллергизация организма переболевших с нарушением иммунного статуса, влияние заболеваний на общую смертность.

В инфекционной патологии постоянно доминируют заболевания гриппом и другими острыми респираторными инфекциями, удельный вес которых превышает 80-90%. В РФ ежегодно регистрируют 2,3-5 тыс. случаев этих болезней на 100 тыс. населения. Из общего количества случаев временной нетрудоспособности на грипп и ОРЗ приходится 12-14%, а наносимый ими экономический ущерб составляет около 90% от всего ущерба, наносимого инфекционными болезнями.

Острые респираторные инфекции вызывают возбудители, число видов которых достигает 200. К ним относят адено-, парамиксо-, корона-, рино-, рео-, энтеровирусы, а также микоплазмы, хламидии, стрептококки, стафилококки, пневмококки и др. В связи с этим разработка эффективных средств специфической профилактики всех ОРЗ в обозримом будущем представляется затруднительной.

Для всех возбудителей острых респираторных вирусных заболеваний характерны их малая стойкость и быстрая гибель в окружающей среде.

С эпидемиологической точки зрения из общей группы острых респираторных инфекций следует выделить грипп в связи с его возможностью к пандемическому распространению.

Грипп - антропонозная вирусная острая инфекционная болезнь с аспирационным механизмом передачи возбудителя. Характеризуется острым началом, лихорадкой, общей интоксикацией и поражением дыхательных путей.

Основные вопросы темы

1. Характеристика возбудителя.

2. Источник возбудителя инфекции.

3. Механизм и пути передачи возбудителя.

4. Эпидемический процесс гриппа.

5. Профилактические и противоэпидемические мероприятия.

Возбудитель гриппа - РНК-содержащий вирус из семейства Orthomyxoviridae рода Influenzavirus. По антигенной характеристике различают 3 серологических типа вируса гриппа - А, В, С.

К поверхностным антигенам вируса относят гемагглютинин (Н) и нейраминидазу (N), на основе которых выделены подтипы вируса гриппа А, например H1N1, H3N2.

В отличие от вирусов типа В и С, характеризующихся более стабильной антигенной структурой, вирус типа А обладает значительной изменчивостью поверхностных антигенов. Она проявляется либо в виде антигенного дрейфа (частичное обновление антигенных детерминант гемагглютинина или нейраминидазы в пределах одного подтипа, что сопровождается появлением новых штаммов вируса), либо в виде антигенного шифта (полное замещение фрагмента генома, кодирующего синтез только гемагглютинина или гемагглютинина и нейраминидазы), приводящего к возникновению нового подтипа вируса гриппа А.

Вирусы гриппа малоустойчивы во внешней среде. Они лучше переносят низкие, отрицательные температуры и быстро погибают при нагревании и кипячении. Отмечается высокая чувствительность вирусов гриппа к ультрафиолетовым лучам и воздействию обычных дезинфицирующих средств.

Вирус гриппа может сохраняться при температуре 4 °С в течение 2-3 нед; нагревание при температуре 50-60 °С вызывает инактивацию вируса в течение нескольких минут, действие дезинфицирующих растворов - мгновенно.

Источник возбудителя инфекции при гриппе - больной человек. Заразительность его проявляется уже в конце инкубационного периода, за несколько часов до начала болезни. В последующем при развитии болезни в наибольшей степени больной опасен в первые 2-5 дней при интенсивном выделении вирусов из верхних дыхательных путей. В редких случаях период заразительности может удлиняться до 10-го дня болезни. Как источник инфекции наиболее опасны больные легкими формами гриппа, которые остаются в коллективах детей и взрослых, пользуются городским транспортом, посещают кино и театры.

Основной резервуар сохранения вируса гриппа в природе - перелетные водоплавающие птицы (дикие утки, гуси, крачки и др.), которые служат естественными источниками инфекции для домашних птиц. Вирус гриппа птиц способен поражать млекопитающих: котиков, китов, норок, лошадей и, что особенно важно, свиней, в организме которых может происходить реассортация вируса гриппа птиц с вирусом гриппа человека. Восприимчивость людей к этим вирусам низкая. Вирус гриппа птиц, в отличие от вируса гриппа человека, более устойчив в окружающей среде. При температуре 36 °С он погибает в течение 3 ч, при 60 °С - через 30 мин, при термической обработке пищевых продуктов (кипячение, жарка) - мгновенно. Хорошо переносит замораживание. В птичьем помете выживает до 3 мес, в воде при температуре 22 °С - 4 сут, при 0 °С - более 1 мес. В тушках птиц вирус сохраняет активность до 1 года.

Механизм передачи вируса гриппа - аспирационный; путь передачи - воздушно-капельный. Во время кашля, чиханья и разговора в воздухе вокруг больного создается «зараженная зона» с высокой концентрацией вируса, которая зависит от частоты экспираторных актов, интенсивности саливации у больного, величины частиц аэрозоля, влажности воздуха, температуры окружающей среды и воздухообмена в помещении. В экспериментах было показано, что вирусы гриппа могут сохранять жизнеспособность в высохшей слюне, слизи, мокроте, пыли, но роль воздушно-пылевого пути передачи возбудителя несущественна.

Восприимчивость населения к новым серотипам (подтипам) вируса гриппа высокая. Постинфекционный иммунитет типоспецифичен, при гриппе А сохраняется не менее 3 лет, при гриппе В - в течение 3-6 лет.

Эпидемический процесс гриппа проявляется спорадической заболеваемостью, эпидемическими вспышками и сезонными эпидемиями (3-6 нед). Периодически возникают пандемии, вызываемые новым подтипом вируса гриппа А, к которому восприимчива подавляющая часть населения. Многолетняя динамика заболеваемости гриппом представлена на рис. 10.1.

Рис. 10.1. Многолетняя динамика заболеваемости гриппом на территории Российской Федерации в 1978-2011 гг.

Сезонные спады в летнее время и эпидемические подъемы в осенне-зимний период связывают с общими факторами, определяющими сезонную неравномерность заболеваемости острыми респираторными инфекциями.

Особенности эпидемиологии гриппа в значительной мере определены уникальной изменчивостью поверхностных антигенов его возбудителя - гликопротеинов гемагглютинина и нейраминидазы.

Степень антигенных различий определяет широту и скорость распространения возбудителя, возрастной состав и уровень заболеваемости, на который влияют метеорологические факторы, переохлаждение, заболеваемость острыми респираторными инфекциями и социально-экономические условия (общение людей, санитарно-гигиеническая обстановка в коллективах детей и взрослых). В течение ХХ в. зарегистрировано несколько пандемий гриппа: «испанка» 1918-1919 гг. - A (HSW1N1); «азиатский грипп» 1957-1958 гг. - A (H2N2); «гонконгский грипп» 1968-1970 гг. - А (H3N2); «русский грипп» 1977-1978 гг. - A (H1N1), а в начале XXI в. - «свиной грипп» 2009-2010 гг. - А (H1N1).

Пандемическое распространение гриппа в современной урбанизированной среде в основном связано с типичными путями распространения вирусов гриппа, зависящих от интенсивности международных транспортных коммуникаций.

В странах северного полушария с умеренным климатом эпидемии гриппа возникают в ноябре-марте, южного - в апреле-октябре.

Появление новых антигенных вариантов вируса гриппа приводит к росту заболеваемости во всех неиммунных возрастных группах с наибольшим поражением детей первых лет жизни.

Возрастной состав болеющих определяется уровнем специфического иммунитета. Маловосприимчивы к гриппу дети в возрасте до 6 мес благодаря пассивному иммунитету, полученному от матери. В возрасте от 6 мес до 3 лет заболеваемость возрастает.

Вирусы гриппа В вызывают эпидемические подъемы заболеваемости, которые нередко возникают после эпидемического роста заболеваемости, вызванной гриппом А, на фоне ее спада, что приводит к возникновению двух волн эпидемии. Вирус гриппа С вызывает спорадические заболевания у детей.

Профилактические и противоэпидемические мероприятия. Основным стратегическим направлением в борьбе с гриппом выступает вакцинопрофилактика. Практика здравоохранения располагает в настоящее время большим набором вакцинных препаратов: живыми, инактивированными, химическими, субъединичными, сплит-вакцинами. Для получения эпидемиологического эффекта от вакцинопрофилактики необходимо, чтобы вакцина содержала те же типы и субтипы вируса, которые обусловят эпидемический подъем заболеваемости на конкретной территории, а группы риска должны быть привиты до начала сезонного подъема заболеваемости гриппом.

Тем не менее защита только от гриппа и отсутствие вакцин против других вирусных ОРЗ не дают ожидаемого эффекта в виде значительного снижения заболеваемости. В то же время накоплены убедительные данные, свидетельствующие, что существуют реальные способы воздействия на эпидемический процесс острых респираторных инфекций. Установлено, что применение средств неспецифической профилактики среди групп риска (школьники 7-14 лет, часто и длительно болеющие) обусловливает значительное сокращение заболеваемости ОРЗ всего населения в целом, что приводит к существенному снижению наносимого этими инфекциями социально-экономического ущерба.

Стабилизации эпидемиологической ситуации по гриппу способствовала иммунизация населения в рамках Национального календаря профилактических прививок, которая была начата в 2006 г. Для иммунизации используют отечественные три-вакцины, содержащие антигенные варианты вирусов гриппа: типа А и В, рекомендованные на предстоящий эпидемический сезон.

Противоэпидемические мероприятия в эпидемическом очаге следует начать с изоляции больного. Госпитализируют больных гриппом только по клиническим и эпидемиологическим показаниям: детей до 3 лет, пожилых с сопутствующими заболеваниями, беременных, а также живущих в общежитиях и интернатах. В помещениях, где находится больной, должна быть налажена вентиляция, УФ-облучение, регулярная влажная уборка с применением дезинфицирующих средств, тщательное мытье посуды. Регулярно сменяемые марлевые маски, закрывающие рот и нос, играют защитную роль для людей, окружающих больного. Работа с контактировавшими с больным включает наблюдение их в течение инкубационного периода, который продолжается от нескольких часов до 2 дней, и по показаниям использование специфических и неспецифических средств защиты (схема 10.2, 10.3).

Похожая информация.

1.3. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ

Организация мониторинга заносов и распространения гриппа птиц в природных условиях на территории Российской Федерации

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Г.Онищенко, Е.Б.Ежлова, Г.Ф.Лазикова); ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора (И.Г.Дроздов, А.Н.Сергеев, А.П.Агафонов, А.М.Шестопалов, Е.А.Ставский, А.Ю.Алексеев, О.К.Демина, Е.Б.Шеметова, А.А.Сергеев, Ю.В.Туманов, В.А.Терновой); ФГУЗ ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора (Г.А.Шипулин, А.Т.Подколзин, С.Б.Яцышина); ФГУЗ РосНИПЧИ "Микроб" Роспотребнадзора (А.В.Топорков, С.А.Щербакова, Н.В.Попов, В.П.Топорков, А.А.Слудский, И.Н.Шарова, М.Н.Ляпин, А.Н.Матросов, В.Н.Чекашов, Т.Ю.Красовская); ГУ НИИ гриппа РАМН (О.И.Киселев, Л.М.Цыбалова, Т.Г.Лобова).

3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 26 декабря 2008 г. N 01/15701-8-34

Список сокращений

ВГПА - вирус гриппа птиц типа А

Биобезопасность - биологическая безопасность

ИФА - иммуноферментный анализ

МФА - метод иммунофлуоресцирующих антител

ОТ-ПЦР - метод обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции

РТГА - реакция торможения гемагглютинации

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

1. Область применения

1. Область применения

1.2. Настоящие методические рекомендации предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и других организаций независимо от организационно-правовой формы собственности.

2. Общие положения

2.1. Целью введения настоящих методических рекомендаций является регламентация мероприятий по эпизоотологическому мониторингу за гриппом птиц в природных условиях. Комплекс мероприятий по мониторингу включает в себя организацию сбора, хранения и транспортирования материала, проведение лабораторных исследований, а также обеспечение биологической безопасности проводимых работ. Основной задачей мероприятий по мониторингу за гриппом птиц является выявление заносов возбудителя и распространения этой инфекции в популяциях диких животных околоводного комплекса с целью проведения адекватных противоэпидемических и профилактических мероприятий среди людей.

2.2. Организация и проведение мероприятий по эпизоотологическому мониторингу гриппа птиц в природных условиях на территории Российской Федерации осуществляется органами и учреждениями Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека во взаимодействии с органами и учреждениями Минсельхоза и Россельхознадзора.

2.3. Объем, характер и направленность проведения профилактических мероприятий среди людей определяются результатами эпизоотологического обследования и прогнозом эпизоотической и эпидемической ситуации по гриппу птиц в конкретных субъектах Российской Федерации.

2.4. Управления Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации, на территории которых обнаружены эпизоотии гриппа птиц, совместно с органами исполнительной власти субъектов, органами Россельхознадзора, МЧС и другими заинтересованными службами и ведомствами планируют проведение мероприятий, направленных на предупреждение распространения вируса среди домашней птицы, на птицефабриках и среди людей, а также направленных на минимизацию последствий от возможных вспышек, если они уже возникли, и их подавление. Комплексный план профилактических мероприятий по гриппу птиц составляют управления Роспотребнадзора совместно с органами управления здравоохранением субъектов Российской Федерации, Россельхознадзором и другими заинтересованными службами и ведомствами сроком не менее чем на 2 года с ежегодным корректированием.

2.5. Прогноз эпидемиологической и эпизоотологической ситуации по гриппу птиц на территории Российской Федерации составляется научно-методическим центром по референс-диагностике и изучению высокопатогенных штаммов вируса гриппа - НМЦГ (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора). Прогноз составляется на основе предоставляемых в НМЦГ заключений об эпидемиологической и эпизоотологической обстановке по гриппу птиц в России (1-2 раза в год), подготовленных Центром экологии и эпидемиологии гриппа - ЦЭЭГ (ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН) и Федеральным Центром по гриппу - ФЦГ (ГУ НИИ гриппа РАМН). Эти заключения формируются на основе представляемой в адрес ЦЭЭГ и ФЦГ информации от курируемых ими соответствующих учреждений (противочумные станции и опорные базы, определенные Приказом Роспотребнадзора от 31.03.05 N 373). Сформулированный обобщенный прогноз и заключения об эпидемиологической и эпизоотологической обстановке в России направляются в Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Данные прогноза эпидемиологической и эпизоотологической ситуации по гриппу птиц на территории Российской Федерации передаются в ВОЗ, на информационный сайт НМЦГ, в Национальные центры по гриппу стран СНГ и учреждения-разработчики (ЦЭЭГ и ФЦГ) после согласования с Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2.6. Консультативно-методическая и практическая помощь управлениям Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации по вопросам профилактики и проведения противоэпидемических мероприятий среди людей на территориях, пораженных эпизоотией гриппа птиц, осуществляется НМЦГ, ЦЭЭГ и ФЦГ, Противочумным центром, региональными центрами по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней, созданных на базе противочумных учреждений.

3. Обоснование необходимости осуществления мониторинга за гриппом птиц

Необходимость проведения мониторинга за гриппом птиц определяется реальной опасностью заносов возбудителя этого заболевания перелетными птицами и формирования очагов инфекции во многих регионах Российской Федерации, а также возникновения эпизоотий среди домашних птиц и потенциальная способность вируса гриппа птиц вызывать заражение человека.

С 1997 г. отмечаются эпизоотии среди диких и домашних птиц, вызванных высокопатогенными вирусами гриппа А субтипа H5N1, способными вызывать также тяжелые заболевания среди людей с высокой летальностью. В последние годы происходит расширение ареала вируса гриппа птиц, увеличение видового спектра носителей, повышение вирулентности циркулирующих штаммов. Способность выживать в окружающей среде в течение длительного времени, особенно при низких температурах, обусловливает расширение ареала распространения вируса и необходимость проведения мероприятий по мониторингу на обширных территориях Российской Федерации.

Случаи передачи вируса гриппа А субтипа H5N1 от человека к человеку не зарегистрированы, хотя семейные очаги заболеваний отмечались неоднократно. Однако совместная циркуляция штаммов вирусов гриппа человека и птиц повышает вероятность события реассортации и возникновения пандемичного варианта вируса гриппа.

Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору (Россельхознадзор) контролирует обстановку по птичьему гриппу, решая в первую очередь проблемы профилактики эпизоотических вспышек среди домашних животных. Вместе с тем эпизоотологический мониторинг гриппа птиц в природных биотопах в настоящее время проводится в недостаточном объеме.

4. Организация эпизоотологического мониторинга за гриппом птиц в природных условиях

4.1. Эпизоотологические и эпидемиологические особенности гриппа птиц

4.2. Цель и задачи эпизоотологического мониторинга за гриппом птиц в природных условиях

Основной целью эпизоотологического мониторинга за гриппом птиц является своевременное выявление случаев заноса вируса гриппа птиц в природные биотопы и отслеживание особенностей распространения этой инфекции среди диких животных околоводного комплекса.

Для обеспечения цели необходимо решить следующие задачи:

выбрать географические точки для мониторинга с составлением кадастра водоемов, где скапливается большое количество птиц лимнофильного комплекса для отдыха, гнездования и кормежки;

организовать выездные мобильные бригады для сбора проб материала на исследование;

установить видовой состав, численность, особенности размещения потенциальных носителей ВГП в биотопах околоводного комплекса;

осуществлять сбор проб полевого материала для лабораторного исследования на наличие вируса гриппа птиц, обработку и оперативный анализ полученных результатов;

изучить эпизоотологический статус отдельных видов и групп птиц и других животных околоводных биоценозов;

изучить параметры эпизоотического процесса в очагах гриппа птиц (сезонные особенности, площади эпизоотии, видовой спектр зараженных животных и др.);

оценить степень опасности инфицирования различных типов водоемов, располагающихся в непосредственной близости от сельских населенных пунктов и крупных птицеводческих хозяйств;

составить список населенных пунктов, где возможно заражение домашних животных гриппом птиц от диких околоводных птиц;

разработать мероприятия по предупреждению эпизоотических вспышек и заболеваний людей;

проводить санитарно-просветительную и разъяснительную работу среди местного населения;

составлять прогнозы развития ситуации;

организовать оповещение органов здравоохранения и местных органов исполнительной власти о результатах эпизоотологического обследования территорий на наличие очагов вируса гриппа птиц и прогнозе развития эпидемической ситуации.

4.3. Тактика и методы эпизоотологического мониторинга за гриппом птиц в природных условиях

Основой эпизоотологического мониторинга за гриппом птиц в природных условиях является обследование водных и околоводных биоценотических комплексов, которое осуществляется в плановом порядке. Поиск возбудителя гриппа птиц должен проводиться, в первую очередь, в околоводных биотопах, расположенных как в местах концентрации и гнездования, так и вдоль, и внутри межконтинентальных трасс сезонных перелетов или кочевок птиц, относящихся, прежде всего, к отрядам гусеобразных, ржанкообразных, поганкообразных, веслоногих, голенастых, журавлеобразных, голубеобразных, куриных, воробьиных. При этом участки для сбора материала выбираются вблизи и (или) на территории населенных пунктов и мест рекреации, а также на территориях, где отмечался падеж птиц от гриппа и случаи заболевания людей. Здесь же подбирают и ключевые участки (пункты долговременного мониторинга - ПДМ), где исследования будут проводиться в течение нескольких сезонов. Каждый участок обследуют минимум 3 раза в год (в период весенних миграций, в гнездовой и послегнездовой периоды). По эпидпоказаниям проводят экстренные дополнительные эпизоотологические обследования.

Предпосылкой для начала эпизоотологического обследования околоводных биотопов является начало весенней миграции птиц околоводного комплекса, информация о случаях падежа среди болотных, озерных, речных птиц.

Эпизоотическая ситуация оценивается на основании эпизоотологического обследования, при котором регистрируется состояние численности фоновых видов животных околоводных биотопов, и по результатам лабораторных исследований, подтверждающих наличие возбудителя гриппа птиц в различных объектах. На основании этих данных дается мотивированное заключение об опасности эпизоотии.

При эпизоотологическом обследовании на грипп птиц в естественных природных биоценозах необходимо обращать внимание на водоемы, где скапливаются одиночные, стайные и колониальные птицы. Особенно на непроточные пресные или слабоминерализованные водоемы с обилием прибрежно-водной и кустарниковой растительности, где имеются оптимальные условия для укрытий, отдыха, кормежки и гнездования птиц. При выборе мест обследования и определении состава и количества проб руководствуются особенностями гидрографической сети обследуемой местности: расположением водоемов, их размерами. В первую очередь контролируются озера, заболоченные низины, пруды, заливы, лиманы, ерики, плавни и др., располагающиеся в непосредственной близости от сельских населенных пунктов.

В процессе эпизоотологического обследования осуществляются наблюдения за погодными условиями, фенологическими явлениями, проводятся учеты птиц, характер их размещения, численности и активности. Необходимо выявлять и отслеживать сроки, длительность и трассы их массовых сезонных перелетов и кормовых кочевок. При поиске очагов гриппа птиц обращают внимание на внешние признаки эпизоотии у диких птиц, особенно отмечая резкое снижение численности и активности пернатых, изменения в их поведении на водоемах, появление вялых особей, взъерошенности перьев, малоподвижность и др. Учитывая высокую чувствительность птенцов к вирусу гриппа, больных особей вероятнее всего выявить в выводковый период.

Основными объектами при сборе проб для лабораторного анализа являются водоплавающие и околоводные птицы: гуси, лебеди, утки, кулики, чайки и крачки, цапли и пастушковые. Для получения полной информации следует добывать и других птиц, обитающих на водоемах, включая дневных хищников (соколообразных) и воробьиных. Обязательно исследование птиц синантропных видов: голубей, сорок, ворон и воробьев. Все павшие птицы, обнаруженные на водоеме или в прибрежной зоне, обязательно являются объектами сбора и лабораторного анализа. Необходимо отлавливать также мелких млекопитающих, обитающих по берегам водоемов: водяную полевку, ондатру, мышей, землероек и др.

Сроки и продолжительность экспедиционных полевых работ определяются погодным режимом, фенологическими явлениями года, особенностями экологии птиц. Оптимальными сроками для сбора материала при изучении гриппа птиц следует считать периоды массовых сезонных миграций перелетных птиц весной и осенью (апрель, сентябрь), а также гнездовой и выводковый периоды от появления птенцов до их подъема на крыло (май-июль).

На предварительном этапе, перед выездом в поле, осуществляется изучение картографических материалов, приобретаются топографические, гидрографические, геоботанические или ландшафтные карты и схемы масштабов 1:25000-1:200000. На основании этих документов составляются календарно-территориальные планы и графики работы, намечаются места стоянок и маршруты движения зоологических групп.

Эпизоотологическое обследование осуществляется путем последовательного радиального объезда территории. Маршруты, последовательность переездов, места, количество и длительность стоянок определяются в зависимости от обстановки, характера местности, условий работы, удобства подъездов и транспортирования собранных проб в лабораторию.

В обязанности экспедиционной группы вменяется также наблюдение за населением: его численностью, хозяйственной деятельностью и характером пребывания на водоемах. Особое внимание обращается на перемещение сельскохозяйственных рабочих, охотников, рыбаков, туристов и отдыхающих в период возможных ухудшений обстановки по гриппу птиц. Необходимо проводить активную разъяснительную и санитарно-просветительную работу среди местного и временного населения, тесно контактируя с представителями местных органов здравоохранения, власти, милиции, представителями ветеринарной службы.

Минимальный состав полевой группы: орнитолог, териолог, вирусолог, эпидемиолог, лаборант, водитель, повар. Отстрел птиц можно проводить на договорной основе силами специальной бригады охотников.

При эпизоотологическом обследовании используют общепринятые зоологические и экологические методы, регламентированные действующими нормативными документами (например, МУ 3.1.1029-01).

4.4. Правила сбора, хранения и транспортирования материала для лабораторного исследования

Все работы по сбору, хранению и транспортированию полевого материала, подозрительного на содержание вируса гриппа птиц типа А (субтипы Н5 и Н7), проводят в соответствии с действующими СП 1.2.036-95 и МУ 3.1.1027-01 . Работу по сбору полевого материала проводят в сезонной защитной одежде, дополненной респиратором, защитными очками и резиновыми перчатками (прилож.6 СП 1.3.1285-03).

Для лабораторного исследования из природных биотопов берут:

птиц, птенцов;

яйца птиц;

фекалии птиц и (или) мазок из клоаки и трахеи;

мелких млекопитающих околоводных биотопов;

воду и ил в местах гнездований.

Добытых птенцов, мелких птиц и млекопитающих (живых и агонирующих особей предварительно умерщвляют с помощью корнцанга) помещают в мешочки из плотной белой ткани (каждое животное в отдельный мешочек), края мешочков два раза подворачивают и туго завязывают. Используют мешочки рубцом наружу. Их снабжают этикетками с указанием даты, точного адреса, стации, вида животного, фамилии сборщика. Для транспортирования тканевые мешочки с тушками животных помещают в клеенчатый мешок.

У крупных птиц берут мазок из клоаки и отсекают голову с участком шеи. Голову помещают в отдельный клеенчатый мешок, который снабжают этикеткой.

Условия хранения . При температуре от 2 до 8 °С - в течение суток, при необходимости длительного хранения животных вскрывают, органы и ткани замораживают при температуре ниже минус 40 °С.

Условия транспортирования . Тушки животных и головы - в течение суток при температуре от 2 до 8 °С. Органы - в замороженном виде в сосуде Дьюара или термоконтейнере с сухим льдом.

Мазки из клоаки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. После забора материала тампон (рабочую часть зонда) помещают в стерильную одноразовую микропробирку с 500 мкл стерильного 0,9%-го раствора натрия хлорида или фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают и ставят в штатив, который затем помещают в термоконтейнер с охлаждающими элементами.

Условия хранения . При температуре от 2 до 8 °С - в течение 3 сут. При необходимости длительного хранения замораживают материал при температуре ниже минус 40 °С.

Условия транспортирования . При температуре от 2 до 8 °С - в течение 3 сут. В замороженном виде - в сосуде Дьюара или термоконтейнере с сухим льдом.

Если птицу необходимо оставить живой (представители редких видов ), у нее после отлова берут мазки из клоаки.

Яйца птиц забирают из гнезда (не более 50% кладки), маркируют и помещают в пластиковые емкости с углублениями для яиц, перекладывая ватой. Емкости помещают в металлический контейнер и доставляют в лабораторию.

Условия хранения . В течение 3 сут хранят при температуре от 2 до 8 °С. При необходимости длительного хранения содержимое яиц переносят в стерильные пластиковые флаконы с завинчивающимися крышками и замораживают при температуре ниже минус 40 °С.

Условия транспортирования . В течение нескольких часов после сбора - при температуре окружающей среды. В течение 3 сут - при температуре от 2 до 8 °С. Содержимое яиц - в замороженном виде при температуре ниже минус 40 °С в термоконтейнере с сухим льдом.

Фекалии птиц (4-5 г) собирают одноразовыми лопатками (шпателями) в стерильные пластиковые контейнеры (пластиковые флаконы с завинчивающимися крышками).

Условия хранения . При температуре от 2 до 8 °С - в течение 3 сут, при температуре минус 40 °С - 30 дней.

Условия транспортирования . При температуре от 2 до 8 °С - в течение 3 сут. Замороженный материал - в термоконтейнере с охлаждающими элементами при температуре минус 70 °С.

Воду и ил собирают в местах гнездовий в прибрежной зоне. Ил (5-10 г) собирают черпаками и переносят в стерильные пластиковые флаконы с завинчивающимися крышками. Воду в объеме 1 л собирают в стерильные пластмассовые бутылки с завинчивающимися крышками. Контейнеры и бутылки маркируют и помещают в металлический контейнер с поглощающим материалом, количество которого должно быть достаточным для адсорбции содержимого в случае нарушения целостности транспортной тары.

Условия хранения . При температуре от 2 до 8 °С.

Условия транспортирования

При заборе проб органов используют стерильный хирургический инструмент (ножницы, скальпели, пинцеты) и стерильную посуду.

Внутренние органы (фрагменты трахеи, легких, селезенки, мозга, синусы, воздухоносные мешки, кишечник) от забитой или павшей птицы, птенцов, а также мелких млекопитающих получают при вскрытии животных. Перед вскрытием тушку погружают в дезинфицирующий раствор (5% хлорамин Б) на 20-30 с. При взятии проб органов животных место будущего разреза обрабатывают 5%-м раствором йода или 70%-м раствором этилового спирта и стерильными инструментами разрезают кожу, мышцы брюшной стенки или кости черепа. Разрез стенки брюшной полости делают "фартуком", доводя боковые линии разреза по ребрам выше уровня сердца, и откидывают образовавшийся лоскут, чтобы обнажить внутренние органы. Перед взятием головного мозга срезают всю затылочную часть черепа. С помощью второго набора инструментов отсекают кусочки внутренних органов размером от небольшой горошины до лесного ореха, над пламенем горелки укладывают пробы в стерильные одноразовые пластиковые пробирки или контейнеры, герметично закрывают.

Условия хранения . Замораживают при температуре ниже минус 40 °С.

Условия транспортирования . В замороженном виде - в сосуде Дьюара или термоконтейнере с сухим льдом.

Мазки-отпечатки , полученные со слизистой оболочки верхних дыхательных путей (лучше) и внутренних органов, готовят на чистых обезжиренных эфиром предметных стеклах, к которым прижимают слизистые или свежие срезы органов. Препараты высушивают на воздухе и фиксируют в течение 20 мин в охлажденном от 2 до 8 °С химически чистом ацетоне. Помещают в штативы для предметных стекол (на ребро). Делают пометку, что мазки фиксированы.

Условия хранения . При температуре от 2 до 8 °С в течение недели, при температуре минус 20 °С - до 6 мес.

Условия транспортирования . При температуре от 2 до 8 °С.

Температура ниже минус 40 °С обеспечивается в сосуде Дьюара, наполненном жидким азотом (минус 196 °С) или в термоконтейнере с сухим льдом (минус 70 °С).

Транспортирование образцов осуществляют в соответствии с СП 1.2.036-95 . Термоконтейнер и сосуд Дьюара обертывают бумагой (обшивают материалом), ошнуровывают, опечатывают и транспортируют в лабораторию с нарочным. К доставляемому материалу прилагают сопроводительное письмо, акт упаковки. На термоконтейнере и сосуде Дьюара должен быть особый знак (ярлык с отметкой) "Опасно! Не открывать во время перевозки". Если предполагается хранение и транспортирование материала в сосуде Дьюара или в термоконтейнере с сухим льдом, для забора материала используют герметичные пластиковые контейнеры, устойчивые к низким температурам, или криопробирки. Сосуды Дьюара и контейнеры с сухим льдом запрещается закрывать герметически, чтобы не препятствовать выходу медленно испаряющихся азота или углекислоты.

Перед выездом в полевые условия сосуды Дьюара должны быть проверены в лаборатории на соответствие паспортным данным и пригодность для эксплуатации и перевозки. При заправке, погрузке, выгрузке и переноске сосудов Дьюара необходимо иметь обычную спецодежду, обувь и брезентовые рукавицы, чтобы в случае разлива или разбрызгивания азота исключить возможность попадания его на открытые части тела. При транспортировании сосуды Дьюара должны быть тщательно закреплены, чтобы исключить опрокидывание, разбрызгивание или разлив азота.

Допускается только однократное замораживание и оттаивание любого материала.

5. Методы лабораторных исследований

Лабораторные исследования проводят в соответствии с действующими санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.3.1285-03 , регламентирующими работу с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности), МУК 4.2.2136-06 "Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высоковирулентными штаммами вируса гриппа птиц типа А (ВГПА).

Метод флуоресцирующих антител (МФА)

Для МФА используют фиксированные мазки-отпечатки органов животных и слизистых оболочек. Реакцию проводят в соответствии с инструкцией к диагностическому препарату "Флуоресцирующие иммуноглобулины для ранней дифференциальной диагностики гриппа А (Н5)", выпускаемого в ООО "Предприятие по производству диагностических препаратов" ГУ НИИ гриппа РАМН (г.Санкт-Петербург).

В каждом мазке просматривают не менее 20-25 полей зрения.

Оценку степени яркости свечения вирусных антигенов, окрашенных люминесцирующими иммуноглобулинами, проводят по общепринятой шкале:

++++ (4+) - яркая флуоресценция внутри клеток тканей;

+++ (3+) - умеренная флуоресценция внутри клеток тканей;

++ и + (2+ и 1+) - слабая флуоресценция внутри (или вне) клеток тканей.

Положительным результатом иммунофлуоресцентного исследования является обнаружение в препарате не менее 5-8 клеток ткани органа, имеющих характерные включения со специфической флуоресценцией на три и четыре плюса.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Молекулярно-генетические исследования проводят в соответствии с действующими нормативными документами: МУ 1.3.1794-03 "Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности"; Рекомендациями ВОЗ по обнаружению вируса гриппа птиц субтипа H5N1 в образцах от людей с подозрением на заболевание (ВОЗ, Женева, август 2007); Инструкцией по применению тест-системы для выявления РНК вируса гриппа А и идентификации субтипов Н5 и Н7 методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (например, наборы "АмплиСенс Influenza virus A H5N1-FL" или "ГРИПП", производство ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора).

Набор "ГРИПП" позволяет выявлять РНК вируса гриппа А и идентифицировать субтипы Н5 и Н7 в материале от павших и больных животных и объектах окружающей среды. Материалом для исследования являются: помет, мазки из клоаки и трахеи, внутренние органы (фрагменты трахеи и легких, селезенка, мозг), вода, смывы с яиц и белок яйца. Тест-система включает комплекты реагентов: для экстракции РНК, для получения кДНК на матрице РНК, для амплификации участков кДНК (проведения ПЦР) и детекции фрагментов амплификации в форматах электрофоретического анализа и гибридизационно-флуоресцентной детекции (FEP и FRT), а также содержит контрольные образцы.

Набор "АмплиСенс Influenza virus A H5N1-FL" позволяет выявлять РНК вируса гриппа А и идентифицировать субтип H5N1 в материале от павших и больных животных и объектах окружающей среды. Материалом для исследования являются: помет, мазки из клоаки и трахеи, внутренние органы (фрагменты трахеи и легких, селезенка, мозг), вода, смывы с яиц и белок яйца. Тест-система включает комплекты реагентов: для экстракции РНК, для получения кДНК на матрице РНК, для амплификации участков кДНК (проведения ПЦР) и детекции фрагментов амплификации в форматах гибридизационно-флуоресцентной детекции (FEP и FRT), а также содержит контрольные образцы.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Для исследования используют индивидуальные сыворотки крови птиц без признаков гемолиза и бактериальной контаминации объемом 0,3-0,5 мл. Постановку реакции осуществляют согласно временному наставлению по применению набора для выявления антител к вирусу гриппа птиц (ВГП) иммуноферментным анализом (например, "Набор для выявления антител к вирусу гриппа птиц методом ИФА" пр-во НПП "АВИВАК").

Учет результатов проводят на спектрофотометре при длине волны 492 нм (при использовании ОФД) или 450 нм (при использовании ТМБ).

Все этапы инкубации проводят в течение 30 мин при температуре 20-30 °С.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

Выявление специфических антител к вирусу гриппа птиц в сыворотках крови птиц осуществляют микрометодом в соответствии с наставлением по применению "Набора антигенов и сывороток для диагностики гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)".

Учет реакции проводят визуально после полного оседания эритроцитов в контрольных лунках (в виде "пуговки"). Титром антител в сыворотке считают наибольшее ее разведение, в котором полностью отсутствует агглютинация эритроцитов антигеном вируса гриппа.

Выявленные в ходе лабораторного исследования положительные пробы отправляют для выделения вируса и его идентификации в ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора.

6. Обеспечение требований биологической безопасности при проведении эпизоотологического мониторинга за гриппом птиц в природных условиях

Для обеспечения биологической безопасности работ при проведении эпизоотологического мониторинга в потенциальных природных очагах гриппа птиц необходимо учитывать следующее:

в проведении обследования участвуют сотрудники противочумных учреждений, а также могут привлекаться сотрудники других медико-биологических организаций и институтов, имеющих допуск к работе с ПБА I-II групп патогенности. Вспомогательный персонал (водители, стрелки и т.п.) допускается к работе после проведения инструктажа;

весь состав отряда или экспедиции должен быть ознакомлен с требованиями биологической безопасности при работе с возбудителями природно-очаговых инфекций, циркулирующих на данной территории. Ответственным за соблюдение этих требований при проведении отлова диких животных и сбора полевого материала является руководитель (начальник) эпидемиологического отряда (экспедиции);

любой материал считается потенциально опасным в отношении возможного содержания возбудителей природно-очаговых болезней, свойственных той ландшафтной зоне, в пределах которой он собран;

рекогносцировочное обследование местности, установку орудий лова осуществляют в специальной одежде (комбинезон или противоэнцефалитный костюм, сапоги);

проверку выставленных орудий лова и сбор полевого материала проводят в рабочей одежде, дополненной фартуками и нарукавниками из водонепроницаемой ткани (пленки), резиновыми перчатками (2 пары) [по окончании работ фартуки, нарукавники и перчатки дезинфицируют];

для защиты органов дыхания используют одноразовые ватно-марлевые повязки или противопылевые респираторы (предпочтение отдается респираторам "Лепесток" или респираторам класса не ниже FFP2);

защиту органов зрения осуществляют плотно прилегающими очками;

дезинфекцию орудий лова и других инструментов проводят ежедневно по окончании работы путем прогревания на солнце (в летнее время), кипячения, обработки дезинфицирующими растворами с последующим проветриванием, ящики и отсадники обрабатываются дезинфицирующими растворами;

разбор полевого материала, вскрытие животных проводят в противочумном костюме I типа (защита органов дыхания аналогична п.6 настоящего раздела, особенности забора материала и подготовки проб для транспортировки в лабораторию изложены в разделе 4.4 "Сбор полевого материала для лабораторного исследования");

по окончании работ, приведенных в п.9, инструменты и защитную одежду дезинфицируют (см. прилож.4), использованные наконечники, пипетки обеззараживают погружением в 6%-й раствор перекиси водорода на 60 мин, дозаторы обеззараживают двукратным протиранием с интервалом 15 мин 6%-м раствором перекиси водорода (экспозиция 120 мин);

остатки полевого материала, не подлежащего лабораторному исследованию, сжигают или обеззараживают автоклавированием, образовавшиеся отходы помещают в специально вырытые ямы, которые затем закапывают;

транспортировку материала в диагностическую лабораторию осуществляют транспортом экспедиции;

участники экспедиции подвергаются ежедневной термометрии, по окончании работ устанавливается обсервация сроком 7 дней;

аптечка экстренной профилактики должна быть укомплектована в соответствии с СП 1.3.1285-03

7. Обеспечение биологической безопасности при проведении лабораторных диагностических исследований

7.1. Проведение работ, не связанных с накоплением вируса, образованием аэрозолей инфицированного материала (окраска мазков, постановка серологических реакций с необеззараженным, диагностическим материалом, серологические исследования с необеззараженным материалом, выделение РНК) осуществляют в противочумном костюме IV типа, дополненном ватно-марлевой повязкой (респиратором) и двумя парами резиновых перчаток. Работы проводят в боксе биологической безопасности II класса*.
________________

7.2. Проведение работ по заражению культур клеток или куриных эмбрионов, а также работ, связанных с возможностью образования аэрозоля, осуществляют в боксах безопасности III класса. Работы проводят в противочумном костюме IV типа, ватно-марлевой повязке (респираторе) и резиновых перчатках (две пары)*.
________________
* При отсутствии боксов биологической безопасности работы проводят в противочумном костюме I типа, дополненном водонепроницаемым фартуком и второй парой перчаток.

7.3. Работа с инактивированным материалом, проведение реакции обратной транскрипции и ПЦР, электрофоретической детекции результатов исследования осуществляют в противочумном костюме IV типа, дополненном резиновыми перчатками (две пары).

7.4. Перед началом работ персонал должен быть проинструктирован о порядке действий в случае возникновения аварий, включающих следующие сценарии: авария в боксе биологической безопасности; авария вне бокса биологической безопасности; авария с образованием аэрозоля.

7.5. Режимы обеззараживания различных объектов при лабораторной диагностике вируса гриппа птиц проводятся в соответствии с СП 1.3.1285-03 :

7.5.1. Обеззараживание поверхностей помещения (пол, стены, двери), оборудования, рабочих столов и другого двукратным протиранием с интервалом 15 мин 6%-м раствором перекиси водорода или 3%-м раствором хлорамина (экспозиция 120 мин) с последующей обработкой УФ в течение 30 мин.

7.5.2. Обеззараживание защитной одежды осуществляют:

а) кипячением в 2%-м растворе соды в течение 30 мин с момента закипания;

б) замачиванием на 30 мин при 50 °С в 3%-м растворе перекиси водорода с добавлением 0,5% моющего средства.

7.5.3. Обеззараживание перчаток - замачиванием на 60 мин в 6%-м растворе перекиси водорода с добавлением 0,5%-го моющего средства или в 3%-м растворе хлорамина.

7.5.4. Обеззараживание лабораторной посуды, автоклавируемых дозаторов, наконечников, вируссодержащих жидкостей, агарозного геля, инструментария из металла проводится методом автоклавирования - давление 2,0 кГс/см (0,2 МПа), температура (132±2) °С, время 45 мин.

7.5.5. Обеззараживание дозаторов - двукратным протиранием с интервалом 15 мин 6%-м раствором перекиси водорода (экспозиция 120 мин), с последующей обработкой УФ в течение 30 мин.

7.6. Аптечка экстренной профилактики должна быть укомплектована в соответствии с СП 1.3.1285-03 и дополнена двумя из следующих противовирусных препаратов: арбидол, ремантадин, альгирем, озельтамивир, занамивир.

8. Нормативные ссылки

1. Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан . М., 1993.. - Примечание изготовителя базы данных.

6. СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортировки микроорганизмов I-IV групп патогенности".

7. Порядок разработки, экспертизы, утверждения, издания и распространения нормативных и методических документов системы санитарно-эпидемиологического нормирования: Сборник Р 1.1.001-1.1.005-96. М.,1998.

8. СП 3.1.097-96 "Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных: Сборник санитарных и ветеринарных правил".

9. МУ 3.1.1029-01 "Методические указания по отлову, учету и прогнозу численности мелких млекопитающих и птиц в природных очагах зоонозов".

10. МУ 1.3.1794-03 "Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности".

11. МУ 4.2.2039-05 "Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории".

12. МУК 4.2.2136-06 "Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высоковирулентными штаммами вируса гриппа птиц типа А (ВГПА) у людей".

16. Методические рекомендации "Быстрая диагностика гриппа и других ОРВИ иммунофлюоресцентным методом". С-Петербург, 2006, утв. Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 25 апреля 2006 г.

17. Методические рекомендации "Выделение вирусов гриппа в клеточных культурах и их идентификация". Санкт-Петербург, 2006, утв. Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 25 апреля 2006 г.

18. СП 1.2.1318-03 "Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I-IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами".

19. Межгосударственный стандарт ГОСТ 25581-91 "Птица сельскохозяйственная, синантропная, дикая, экзотическая". Дата введения 01.01.93. Методы лабораторной диагностики гриппа.

20. Приказ Минздравсоцразвития России от 31.05.05 N 376 "О предоставлении внеочередных донесений о чрезвычайных ситуациях санитарно-эпидемиологического характера".

21. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 31.03.05 N 373 "О совершенствовании системы эпидемиологического надзора и контроля за гриппом и острыми респираторными вирусными инфекциями".

22. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 10.05.07 N 144 "О создании научно-методического центра по референс-диагностике и изучению высокопатогенных штаммов вируса гриппа".

23. Приказ Минсельхоза России от 27.03.06 N 90 (регистрационный номер 7756) "Об утверждении Правил по борьбе с гриппом птиц".

24. Рекомендации по защите людей, контактирующих с инфицированной птицей и участвующих в массовом забое животных, потенциально инфицированных вирусами гриппа птиц, утв. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 05.08.05 N 0100/6198-0523.

25. Руководство ВОЗ по диагностике и контролю над гриппом животных (WHO/CDC/CSR/NSC/2002.5).

26. Рекомендации ВОЗ по обнаружению вируса гриппа птиц субтипа H5N1 в образцах от людей с подозрением на заболевание. ВОЗ, Женева, август 2007. (Recommendations for laboratory procedures to detect avian influenza A H5N1 virus in specimens from suspected human cases. WHO Geneva, August 2007).

27. Онищенко Г.Г., Киселев О.И., Соминина А.А. Усиление надзора и контроля за гриппом как важнейший элемент подготовки к сезонным эпидемиям и очередной пандемии (руководство). Москва-Санкт-Петербург, 2004.

28. Птичий грипп. Клинические особенности, стандартизованные принципы диагностики, лечения и профилактики, утв. Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 02.09.05.

29. Неклюдова Л.И., Гуменник А.Е., Федорова Ю.Б. и др. Практическая вирусология (Часть III). M., 1981.

30. Выявление циркуляции арбовирусов. Методы вирусологических и серологических исследований. Клинико-эпидемиологические характеристики малоизученных арбовирусных инфекций. Подходы к мониторингу природных очагов арбовирусов /Под ред. акад. РАМН Д.К.Львова //Итоги науки и техники. Сер. Вирусология. Т.25. M., 1991.

31. Сюрин В.Н., Фамуйленко А.Я., Соловьев Б.В. и др. Вирусные болезни животных. M.: ВНИТИБЛ, 1998.

Приложение 1. Перечень документации, разрешающей сбор полевого биологического материала в рамках мониторинга за гриппом птиц в границах Российской Федерации

Приложение 1

1. Разрешение на отстрел птиц.

А) Разрешение выдается региональной охотоинспекцией. Организация, планирующая отстрел птиц с целью обнаружения особей, пораженных вирусом гриппа птиц, пишет письмо-обоснование на имя руководителя региональной охотоинспекции. Письмо пишется на фирменном бланке по установленной форме.

Б) Отстрел птиц может осуществлять только член регионального общества охотников, наделенный соответствующими документами. Целесообразно привлекать из числа сотрудников организации, проводящей эпизоотологическое обследование, лиц, имеющих право на ведение охотничьего промысла. Приобретение расходных материалов (патроны) в достаточном количестве осуществлять из статьи командировочных расходов.

2. Разрешение на проведение эпизоотологических исследований в околоводных стациях с правом разбивания временного лагеря на водоохранной территории.

Разрешение выдается региональной рыбинспекцией. Необходимо предоставить разъяснения о цели и задачах планируемых исследований на контролируемых рыбинспекцией территориях, которые пишутся на фирменном бланке по установленной форме.

3. Согласование с региональными органами по экологии.

Необходимо четкое разъяснение планируемых мероприятий в связи с реальной угрозой осложнения эпидситуации. Пишется разъяснительное письмо на имя руководителя регионального комитета по экологии на фирменном бланке по установленной форме.

4. Согласование с пограничной службой РФ.

Согласование проводится только в случаях проведения эпизоотологических исследований в приграничных зонах. Просьба о разрешении работы в приграничной зоне пишется на имя начальника погранслужбы данного региона на фирменном бланке по установленной форме.
Произошла ошибка

Платеж не был завершен из-за технической ошибки, денежные средства с вашего счета
списаны не были. Попробуйте подождать несколько минут и повторить платеж еще раз.

Грипп птиц - высоко контагиозная вирусная инфекция, которая может поражать все виды пернатых. Наиболее чувствительными из домашних видов являются индюки и куры. Дикие виды птиц могут служить переносчиками инфекции. В силу естественной резистентности они сами, как правило, при этом не заболевают и могут преодолевать в процессе миграции значительные расстояния. Естественным резервуаром для вирусов гриппа птиц (ВГП) являются водоплавающие птицы, которые чаще всего ответственны за интродукцию инфекции в домашние хозяйства.

Вирусы гриппа птиц принадлежат к вирусам гриппа типа А семейства ORTHOMYXOVIRIDAE . Существует несколько подтипов возбудителя, которые определяются в зависимости от особенностей антигенной структуры гемагглютинина (Н) и нейраминидазы (N ). В настоящее время известно 15 подтипов Н (Н1 - Н15) и 9 подтипов нейраминидазы (N 1 - N 9), которые могут реасортировать в различных комбинациях. Среди наиболее патогенных для домашних птиц выделяются вирусы с антигенной формулой H 7N 7 (вирус «куриной чумы») и H 5N 1, способные вызывать поголовную гибель кур.

За последние 7 лет вирусы гриппа птиц H 5N 1 и H 7N 7 в результате мутаций резко изменили свои биологические свойства и приобрели способность не только преодолевать хозяйский барьер с непосредственным инфицированием людей (минуя промежуточного хозяина), но и вызывать чрезвычайно тяжёлые клинические формы заболевания, значительная часть которых заканчивается летательными исходами.

Выделяемые вирусы подтипа H 5N 1 активно реасортируют и, преодолевая межвидовой барьер, «направляются» из резервуара водоплавающих птиц к домашним птицам, а в последнее время - к диким птицам, обитающим на суше, и к человеку. Это определяет необходимость более широкого надзора и контроля за инфекцией, в особенности, если учесть, что вирус гриппа (в отличие от других респираторных агентов) необычно быстро распространяется и этот процесс не поддаётся контролю традиционными способами изоляции больных, карантинных мер или рекомендаций путешествующим людям. Это определяет срочную необходимость усиления надзора за гриппом для определения факторов, позволяющих птичьему вирусу передаваться людям и для последующей разработки эффективных вакцин против вируса Н5 как для людей, так и для животных.

В настоящее время вирус получил более широкое распространение в природе ввиду его адаптации к другим млекопитающим (кошкам, собакам, свиньям).

Клиническая картина заболевания у людей

Длительность инкубационного периода при гриппе A (H 5N 1) составляет обычно 2-3 дня с колебаниями от 1 до 7 дней. Заболевание начинается остро с озноба, миалгии, возможны боли в горле, ринорея. В странах Юго-Восточной Азии более чем у половины больных отмечалась водянистая диарея при отсутствии слизи и крови в фекалиях, в четверти случаев повторная рвота. Повышение температуры тела является одним из ранних и постоянных симптомов. Уже в первые часы болезни температура превышает 38С и часто достигает высоких и гиперпиретических значений. В разгар заболевания (на 2-3 день болезни) характерно поражение нижнего отдела дыхательных путей (нижний респираторный синдром) с возможным развитием первичной вирусной пневмонии: кашель, одышка и дисфония. Кашель обычно влажный, в мокроте нередко отмечается примесь крови. Аускультативно - жёсткое дыхание, хрипы. На рентгенограмме грудной клетки в ранние сроки находят неспецифические изменения в лёгких - диффузные, мультифокальные или отдельные инфильтраты, которые способны к быстрому распространению и слиянию. В некоторых случаях могут быть обнаружены сегментарные или долевые уплотнения. Прогрессирование заболевания сопровождается развитием дыхательной недостаточности и острого респираторного дистресс-синдрома.

Проявлениями пантропизма вируса и развивающегося в процессе интоксикации может быть поражение печени и почек, более чем у 30% больных развивается острая почечная недостаточность.

Дети младшего возраста переносят заболевание в тяжёлой форме. К основным синдромам у них возможно присоединение энцефалита. В этом случае симптоматика дополняется сильной головной болью, рвотой, нарушением сознания и тошнотой.

Прогноз, как правило, неблагоприятный. Летальность достигает 50-80%. Летальный исход обычно наблюдается на второй недели болезни.

Химиопрофилактика

Химиопрофилактика птичьего гриппа осуществляется путём приёма индукторов интерферона (циклоферона и амиксина), Ремантадина, Альгирема, Арбидола и Озельтамивира (Тамифлю) в качестве противовирусных препаратов.Химиопрофилактика наиболее эффективна в группах риска, среди контактных лиц и в очагах инфекции. Продолжительность приёма эквивалентна периоду наступления стадии реконвалесценции.

Показано использование симптоматических средств. При гипертермии показаны жаропонижающие препараты (парацетамол, ибупрофен или найз).

Препараты, которые не используют в терапии гриппа A (H 5N 1): салицилаты (аспирин), анальгин. Анальгин и антигриппины категорически противопоказаны для лечения птичьего гриппа.

Антибиотики назначаются только при подозрении на смешанный характер пневмонии.

Заключение

Настораживающим аспектом является возможность одновременной коинфекции людей человеческими и птичьими вирусами с результирующим возникновением реассортантов, несущих поверхностные гены от птичьих вирусов, а внутренние гены от эпидемических человеческих вирусов, которые могут придать возбудителю способность к трансмиссии в популяции людей и породить новый пандемический вирус. Кроме того, вызывает опасение возможность прямой передачи птичьего вируса от человека к человеку.

НИИ гриппа РАМН

душевые кабины стеклянные design-glass.ru