Гельминты igg ифа бест. Приборы и наборы реагентов для ИФА Российского производства Кундельский Р.В., к.э.н. Генеральный директор ЗАО «Вектор-Бест-Европа» - презентация Чем опасен гельминтоз для ребенка

Количество определений 96 (48 в дублях)
Формат рабочего планшета: стрипированный 12х8, ломающийся по 1 лунке.
Чувствительность: 1,5 Ед/мл.
Диапазон измерений: 0-400 Ед/мл.
Объем исследуемого образца - не более 25 мкл.
Стандартизация условий проведения ферментативной реакции с хромогеном в термостатируемом шейкере при 37ºС.
Состав набора:
1. Планшет стрипированный 12 по 8 лунок, готовый к применению - 1 шт.
2. Пробы калибровочные готовые для использования (0-400 Ед/мл) окрашенные с различной степенью интенсивности в зависимости от концентрации - 6 флаконов.
3. Образец контрольный - 1 флакон.
4. Конъюгат однокомпонентный, готовый для использования, не требующий разведения - 1 флакон.
5. Раствор для разведения сывороток - 1 флакон.
6. Субстрат хромогенный, однокомпонентный - раствор тетраметилбезидина плюс (ТМБ+) готовый для использования, не требующий разведения - 1 флакон.
7. Раствор буферный фосфатно-солевой с твином - 2 флакона.
8. Стоп-реагент, готовый для использования - 1 флакон.
9. Пленка для заклеивания планшета - 1 шт.
10. Трафарет для построения калибровочного графика - 1 шт.
11. Ванночка для реагента - 2 шт.
12. Наконечники для пипетки на 5-200 мкл - 16 шт.
Упаковка планшета - пакет тика "зип-лок".
Стабильность рабочего раствора ФСТ-Т не менее 5 суток при температуре +2...8°C.
Набор хранить при температуре +2...8°C. Срок годности - 1 год с даты производства.
Зарегистрировано в Росздравнадзор.

Ведущие российские производители В сегменте наборов реагентов для диагностики инфекций: - ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск; - ООО «НПО Диагностические системы», г. Н.Новгород; - ЗАО «Эколаб», г. Электрогорск МО. В области наборов реагентов для диагностики неинфекционных заболеваний и физиологических состояний: - ООО «Алкор-Био», г. Санкт-Петербург; - ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск; - ООО «Хема-Медика», г. Москва. В сегменте реагентов для лабораторной диагностики аллергий: - ООО «Алкор-Био», г. Санкт-Петербург; - ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск; - ООО «НПО Иммунотекс», г. Ставрополь. Производство лабораторного оборудования: - ООО «Пикон, г.Москва

Оценка степени возможного импортозамещения по номенклатуре тестов Номенклатура аналитов, ед. Разрешены к использованию в РФ Производимые в РФСтепень возможного импортозамещения Маркеры инфекционных заболеваний % Маркеры неинфекционных заболеваний и показатели физиологических состояний % Маркеры аллергии % Итого: %

Оценка степени импортозамещения по объему рынка продукции для планшетного ИФА Сегменты рынкаОбъем рынка в РФ, млн.р. Объем продаж отечественных производителей, млн.р. Доля импортозамещения Маркеры инфекционных заболеваний % Маркеры неинфекционных заболеваний и показатели физиологических состояний % Маркеры аллергии % Оборудование50051% Итого: %

Оценка степени импортозамещения по объему рынка продукции для иммунохимических методов в целом Сегменты рынкаОбъем рынка в РФ, млн.р. Объем продаж отечественных производителей, млн.р. Доля импортозамещения Маркеры инфекционных заболеваний % Маркеры неинфекционных заболеваний и показатели физиологических состояний % Маркеры аллергии % Оборудование % Итого: %

Проблемы отечественных производителей в отрасли: Метод ИФА устаревает. Происходит постепенное замещение отечественных ИФ- реагентов на импортные хемилюминесцентные; Существующая система госзакупок стимулирует либо приобретение самых дешевых товаров, либо уникальных по характеристикам импортных изделий; Одна из главных причин недостаточного развития отечественных производителей автоматического оборудования и локализации производства импортных изделий – таможенный административный барьер; Основная проблема последнего времени – коллапс системы государственной регистрации новой продукции в РЗН. Допуск новой продукции на рынок практически остановлен и те зарубежные производители, которые ранее зарегистрировали длинными списками продолжают иметь преимущество над отечественными; Основная причина технологического отставания – невозможность получить право производить совместимую продукцию к современному оборудованию; Низкая степень консолидации отечественных производителей и постоянные ценовые войны между собой не дают возможности разрабатывать передовые продукты и конкурировать с ведущими игроками на равных, в том числе и на зарубежных рынках.

Предложения: В рамках ФКС ввести бесконкурсный порядок государственных закупок медицинских изделий с последующей попозиционной публикацией. Определение лимитов финансирования на основе среднерыночной цены даст определенные преимущества отечественным производителям, позволит ограничить потребление дорогостоящих импортных реагентов и контролировать более эффективно освоение бюджетных средств; Содействовать укрупнению и консолидации отечественных производителей с целью концентрации ресурсов на разработке современных продуктов и выхода на международный рынок. Бесконкурсный порядок госзакупок быстро оставит на рынке только реально конкурентоспособные предприятия; Выделить гос.средства для стимулирования, на принципах частно- государственного партнерства, разработки достаточной для обеспечения биологической безопасности страны номенклатуры тестов; Таможенные льготы должны быть на комплектующие, а не на готовые изделия; Гармонизировать систему регистрации с европейской, где медицинские изделия с низким уровнем потенциального риска регистрируются на основании декларации соответствия.

ПРЕПАРАТЫ

ОЦЕНКА НОВОЙ ИФА ТЕСТ-СИСТЕМЫ

«Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ»

12Жираковская Е.В.,3Игнатьев Г.М., 3Индикова И.Н., 12Тикунова Н.В.

1 ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, п. Кольцово, Новосибирская обл.;

2 Институт химической биологии и фундаментальной медицины, Новосибирск;

3 Государственный институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевичаг Москва

Приводятся результаты испытаний чувствительности, специфичности и воспроизводимости нового набора реагентов «Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ» разработанного в ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск). Полученные данные позволяют прогнозировать диагностическую достоверность результатов при использовании данной тест-системы для выявления антигена ротавируса группы А в клиническом материале.

Ключевые слова: ИФА тест-система, эффективность, ротавирус А

Ротавирусы группы А (семейство Reoviridae, род Rotavirus) являются наиболее распространенной причиной тяжелого гастроэнтерита у детей младшего возраста во всем мире. Нередко заболевают и взрослые с ослабленным иммунитетом. Ротавирусная инфекция (РВИ) является высококонтагиозным заболеванием с множественными путями распространения. Источником инфекции служит человек с манифестной или бессимптомной формой заболевания, а также вирусоноситель . Среди детей и взрослых РВИ может проявляться в виде спорадических случаев, локальных групповых заболеваний, вспышек и имеет повсеместное распространение . Фекально-оральный механизм передачи этой инфекции реализуется пищевым (молоко и молочные продукты, детское питание), водным и контактно-бытовым путями .

Постановка диагноза ротавирусного гастроэнтерита по клинической картине, особенно при спорадической заболеваемости, представляет определенную сложность, поскольку характерные для этой инфекции симптомы мало отличаются от симптомов других острых кишечных инфекций (ОКИ) различной этиологии. Дифференциальная диагностика у больных ротави-русным гастроэнтеритом проводится как с пищевыми токсикоинфекциями, так и с другими ОКИ вирусной (норовирусы, астровирусы, аденовирусы, коронави-русы, энтеровирусы Коксаки и ECHO) и бактериальной (сальмонеллез, дизентерия, холера, иерсиниоз, условно-патогенные микроорганизмы) этиологии . К сожалению, не во всех специализированных лечебных учреждениях РФ проводят диагностику ротави-русной инфекции.

Диагностические методы при РВИ направлены на обнаружение цельных вирионов, вирусного антигена или вирусоспецифической РНК в фекалиях . Перспективным подходом к прямому выявлению вирусов как в клиническом материале, так и в объектах окружающей среды, является метод обратной транскрипции - по-лимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) . В последние годы создаются тест-системы, основанные на современных научных разработках с комбинированием различных методов детекции ротавирусов: мультиплексная ПЦР с гибридизационно-флуоресце-нтной детекцией продуктов амплификации «по конечной точке»; иммуно-ПЦР (IPCR) «по конечной точке» с детекцией в реальном времени; количественная ОТ-ПЦР с детекцией в реальном времени . В научно-исследовательских лабораториях для быстрого выявления ротавирусов используют электронную микроскопию . Однако все вышеперечисленные методы являются достаточно трудоемкими и требуют наличия дорогостоящих приборов и высококвалифицированного персонала. Поэтому при проведении лабораторной диагностики в стационарах и в амбулаторных условиях предпочтение отдается методам, основанным на обнаружении вирусного антигена в фекалиях с помощью имму-ноферментного анализа (ИФА) с моно- и поликпональны-ми антителами к ротавирусам . Этот метод доступен для практических лабораторий, прост в постановке и позволяет достаточно быстро получить результат.

Цель настоящей работы - изучение диагностической эффективности нового набор реагентов «Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ» разработанного в ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск.

^Сентябрь-декабрь

Материалы и методы

Материалом исследования служили образцы фекалий детей раннего возраста с диагнозом ОКИ и без клинических проявлений кишечной инфекции, находившихся на стационарном лечении в отделениях кишечных инфекций и респираторных инфекций МУЗ «Детская городская клиническая больница №3» Новосибирска. Образцы фекалий собирали в одноразовые стерильные пластиковые контейнеры в объеме 2-3 мл при поступлении пациентов в отделение стационара и хранили при - 20 °С в течение 15 суток. Более длительное хранение материала осуществлялось при - 70 °С.

В работе была использована предварительно протестированная на наличие возбудителей ОКИ панель из 104 образцов фекалий. Из них:

30 образцов, в которых методами ИФА и ОТ-ПЦР были выявлены только ротавирусы группы А; гено-типирование методом ОТ-ПЦР показало, что фекальные пробы содержали ротавирусы генотипа PG1 (18 образцов), PG2 (4 образца), PG3 (3 образца), PG4 (2 образца), PG4 (1 образец), PG9 (1 образец), PG3 (1 образец);

14 образцов, в которых методом ОТ-ПЦР были выявлены только норовирусы второго генотипа, что было подтверждено определением нуклеотидной последовательности 5" - области гена капсида, расположенного на геноме норовирусов в районе 5085-5485 h.;

15 образцов, в которых методом ОТ-ПЦР были выявлены только астровирусы, что было подтверждено определением нуклеотидной последовательности 5" - области гена капсида, расположенного на геноме астровирусов в районе 4526 - 4955 н.; 15 образцов, в которых методом ПЦР были выявлены только аденовирусы;

30 образцов фекалий (контроль) от детей без клинических проявлений кишечной инфекции, госпитализированных в респираторное отделение больницы; предварительный анализ не выявил в этих образцах вышеперечисленных вирусных патогенов.

Тестирование образцов на наличие или отсутствие рота-, норо-, астро-и аденовирусов проводили методом ОТ-ПЦР с использованием зарегистрированных в РФ коммерческих наборов «АмплиСенс No го virus 1, 2 genotypes - 306/322», «АмплиСенс Astrovirus -165», «АмплиСенс Adenovirus - 462», «АмплиСенс Rotavirus - 290» (производства ФГУН ЦНИИ эпидемиологии, РФ). Исследование образцов проводили в соответствии с инструкциями по применению соответствующих наборов реагентов в период срока годности. Положительные по наличию ротавируса образцы были генотипированы методом ОТ-ПЦР . Определение наличия или отсутствия антигена ротавируса так же проводили методом ИФА с использованием коммерческой тест-системы IDEIA™ Rotavirus, (DakoCytomation, Великобритания) в соответствии с инструкцией к набору.

При проведении испытаний набора реагентов «Рота-вирус-антиген-ИФА-БЕСТ» все вышеуказанные образцы (104) были зашифрованы и трехкратно протестированы исследуемым набором. После завершения испытаний образцы были дешифрованы и результаты проанализированы.

Результаты и обсуждение

Чувствительность комплекта реагентов «Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ» оценивали по числу совпадений положительных результатов (в %) тестирования образцов с помощью испытуемой тест-системы и препаратов сравнения. При этом было выявлено, что при использовании комплекта реагентов «Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ» все 30 образцов с подтвержденным наличием ротавируса А были положительными (табл. 1). Следовательно, чувствительность исследуемого комплекта реагентов при выявлении ротавирусов А составила 100 %. Следует отметить, что в состав панели вошли образцы с семью различными генотипами ротавирусов, и все они были успешно выявлены комплектом реагентов « Рота ви рус - анти ген - И ФА- Б ЕСТ».

Специфичность тест-системы оценивали по числу совпадений отрицательных результатов (в %) тестирования образцов с помощью испытуемой тест-системы сданными предварительных исследований. Для оценки специфичности в используемую панель были включены 30 образцов, в которых вирусные патогены выявлены не были, а также 14 образцов, в которых были выявлены только норовирусы второго генотипа с помощью метода ОТ-ПЦР, 15 образцов, в которых методом ОТ-ПЦР были выявлены только астровирусы; 15 образцов, в которых методом ПЦР были выявлены только аденовирусы. Было определено, что в 69 из 74 отрицательных образцов значения оптических плотностей при детекции набором реагентов «Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ» на присутствие ротавируса А не превышали фоновых, то есть значений, полученных в результате измерения оптической плотности в контрольных отрицательных образцах. Два образца, содержащих астровирусы, один образец - норовирус второго генотипа, один образец -аденовирус и два образца, в которых ни один из вышеперечисленных вирусных патогенов обнаружен не был, продемонстрировали положительные показатели оптической плотности. Следует отметить, что в образцах, в которых ни один из вирусных патогенов ранее обнаружен не был, положительные сигналы были зарегистрированы только в одном из повторных исследований (табл. 2). Таким образом, специфичность комплекта реагентов «Ро-тавирус-антиген-ИФА-БЕСТ» составила 93,2%.

В ходе проведения испытаний оценивали воспроизводимость результатов, полученных при использовании испытуемого комплекта реагентов «Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ» на клиническом материале - все образцы были исследованы трехкратно в различных опытах для определения варьирования результатов. Практически во всех случаях были получены схожие результаты: тест-система выявляла все отрицательные и положительные пробы одинаково. Исключение составили две пробы, в которых ранее не были выявлены ни один из вирусных патогенов: в одном из повторов для обоих образцов значения оптической плотности превысили ОПкрит. Следует отметить, что превышение было незначительным (табл. 2). Таким образом, воспроизводимость результатов составила 98,8%.

Результаты проведенных испытаний показали, что испытуемый набор реагентов «Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ» по своей диагностической эффективности -специфичности, чувствительности и воспроизводимости - сопоставим с имеющимися в РФ диагности-

ческими тест-системами, что позволяет прогнозировать диагностическую достоверность результатов при использовании исследованного набора реагентов «Ро-тавирус-антиген-ИФА-БЕСТ» для выявления антигена ротавируса группы А в клиническом материале.

Литература

1. Богомолов Б.П. // «Инфекционные болезни: неотложная диагностика, лечение, профилактика». - М., Нью-диамед. - 2007.

2. Васильев Б.Я., Васильева Р.И., Лобзин Ю.В.// «Острые кишечные заболевания. Ротавирусы и ротави-русная инфекция». - С.-Пб., Лань. - 2000.

3. Жираковская Е.В., Тикунов А.Ю., Боднев O.A., и др.// «БИОпрепараты». - 2008 - № 2. - с. 15 - 18.

4. Жираковская Е.В., Малеев В.В., Боднев A.C. и др. // ЖМЭИ - 2008 - №.4. - с. 12 - 16.

5. Игнатюк Т.Е., Голутвин И.А., Насикан Н.С., и др. // «Вопросы вирусологии». - 2003. - т. 48. - №6.- с. 1721.

6. Новикова H.A., Федорова О.Ф., Епифанова Н.В., Чуп-рова А.Б. // «Вопросы вирусологии». - 2007. - т.52. -№ 3 - с. 19-23.

7. Подколзин А.Т., Мухина A.A., Шипулин Г.А., и др.//

«Инфекционные болезни». - 2004. - т. 2. - № 4. - с. 85 -91.

8. Подколзин А.Т., Фенске Е.Б., Абрамычева Н.Ю., и др.// «Терапевтический архив». - 2007. - т. 79. - № 11. -с. 10-16.

9. Сергевнин В.И., Вольдшмидт Н.Б., Сармометов Е.В., и др. // «Эпидемиология и инфекционные болезни». -2004.-№ 6.-с. 17-20.

10.Сергевнин В.И., Вольдшмидт Н.Б., Сармометов Е.В., и др. // Гигиена и санитария. - 2007. - № 1. - с. 56 -58.

11. Arcangeletti М.С., De Conto Е, Pinardi F., at al. // Acta Biomed. Ateneo. Parmense. - 2005. -V. 76 (3). - P. 165 -170.

12.Gladstone B.P., Iturriza-Gomara M., Ramani S., at al. // Epidemiol. Infect. - 2008. V. 136(3). - P. 399-405.

13. Min B.S., NohYJ., Shin J.H., atal. //J. Virol. Methods. -2006. - V. 137 (2). - P. 280 - 286.

14. Santos N., Honma S., Timenetsky Mdo C., at al. //J. Clin. Microbiol. - 2008. V. 46 (2). - P. 462 - 469.

15.Schets F.M., van Wijnen J.H., Schijven J.F., at al. //Appl. Environ. Microbiol. - 2008. - V. 74 (7). - P. 2069 - 2078.

16. Stockman L.J., Staat M.A., Holloway M., at al. // J. Clin. Microbiol. - 2008. - V. 46 (5). - P. 1842 - 1843.

Оценка чувствительности и специфичности комплекта реагентов «Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ»

Таблица 1

№п/п Кол-во образцов Результаты детекции препаратами сравнения IDEIA Rotavirus Астро-ПЦР Hopo 2-ПЦР Адено-ПЦР Результаты детекции набором «Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ»

1. 30 30 0 0 0 30

2. 15 0 15 0 0 2

3. 14 0 0 14 0 1

4. 15 0 0 0 15 1

Оценка специфичности комплекта реагентов «Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ>-

Таблица 2

ПЦР АмплиСенс

rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus

0,443 1,306 0,676 0,418

Ротавирус-антиген-ИФА-БЕСТ ЗАО «Вектор-Бест»

ОПКрит ОПКрит ОПКрит

0,250 0,263 0,251

> 4,000 > 4,000 > 4,000 3,926 > 4,000 3,939

> 4,000 > 4,000 > 4,000

£Сентябрь

Декабрь 2009 г.

АмплиСенс

rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus

IDEIA Rotavirus DakoCytomation ОПКрит = 0,150

0,401 0,322 1,659 0,566 0,518 1,278 1,285 0,809 1,160 0,407 0,218 0,703 1,889 1,069 1,302 0,879 1,842 0,747 0,793 1,013 1,124 0,670 0,726 0,683 0,814 0,997 0,206 0,052 0,050 0,034 0,040 0,048 0,040

Ротавирус-

ОПКрит 0,250

> 4,000 3,933 3,987 3,918 3,853 3,972

> 4,000 3,864 3,879 3,897 3,800

> 4,000 3,981

> 4,000 3,713

> 4,000 4.000

> 4,000 3,989

> 4,000 3,872 0,088 0,103 0,230 0,240 0,268 1,819 0,062

антиген-ИФА-БЕСТ «Вектор-Бест»

ОПКрит ОПКрит 0,263 0,251

> 4,000 > 4,000

> 4,000 > 4,000 3,821 3,899

> 4,000 3,964 3,845 3,923 3,962 3,871

> 4,000 3,929

> 4,000 3,881 3,884 > 4,000

> 4,000 > 4,000 3,800 3,851 3,818 >4,000

> 4,000 > 4,000

> 4,000 3,995

> 4,000 > 4,000

> 4,000 > 4,000 3,837 3,839

> 4,000 > 4,000

> 4,000 3,986

> 4,000 > 4,000

> 4,000 3,998

> 4,000 > 4,000

> 4,000 3,823 0,063 0,073 0,054 0,061 0,255 0,250 0,256 0,244 0,278 0,560 1,117 1,235 0,052 0,052

astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus norovirus norovirus norovirus norovirus norovirus norovirus norovirus norovirus norovirus norovirus norovirus norovirus norovirus norovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus

IDEIA Rotavirus DakoCytomation OIIKpHT = 0,150

0,043 0,043 0,041 0,052 0,040 0,046 0,041 0,040 0,037 0,039 0,030 0,045 0,032 0,030 0,037 0,042 0,034 0,039 0,043 0,043 0,045 0,039 0,050 0,034 0,050 0,043 0,050 0,042 0,041 0,042 0,038 0,047 0,039

PoTaBHpyc-aHTHreH-HOA-EECT 3AO «BeKTop-EecT»

OnKpHT OnKpHT OIIKpHT

0,250 0,263 0,251

0,115 0,075 0,082

0,053 0,046 0,058

0,233 0,198 0,189

0,144 0,105 0,128

0,243 0,062 0,073

0,043 0,040 0,046

0,069 0,043 0,041

0,143 0,044 0,058

0,220 0,206 0,230

3,475 2,577 2,405

0,223 0,247 0,240

0,232 0,236 0,231

0,048 0,042 0,041

0,121 0,085 0,093

0,132 0,111 0,174

0,122 0,052 0,063

0,061 0,044 0,054

0,073 0,035 0,048

0,089 0,046 0,046

0,047 0,043 0,044

0,041 0,039 0,044

0,083 0,046 0,038

0,168 0,074 0,097

0,247 0,118 0,099

0,248 0,251 0,242

0,243 0,259 0,250

0,054 0,048 0,055

0,048 0,040 0,037

0,058 0,045 0,046

0,053 0,045 0,049

0,069 0,058 0,065

0,912 0,344 0,379

0,089 0,037 0,042

Декабрь 2009 г.

ПЦР АмплиСенс

adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц отриц

IDEIA Rotavirus DakoCytomation ОПКрит = 0,150

0,040 0,044 0,039 0,041 0,260 0,044 0,046 0,042 0,047 0,041 0,039 0,048 0,055 0,035 0,039 0,040 0,041 0,033 0,046 0,049 0,048 0,038 0,039 0,029 0,037 0,036 0,043 0,043 0,039 0,042 0,034 0,037 0,041 0,036

Ротавирус - антиген- ИФА-БЕСТ ЗАО «Вектор-Бест»

ОПКрит О П Крит ОПКрит

0,250 0,263 0,251

0,105 0,042 0,043

0,046 0,143 0,133

0,227 0,045 0,042

0,065 0,068 0,054

0,125 0,039 0,042

0,196 0,191 0,182

0,209 0,170 0,154

0,316 0,071 0,073

0,058 0,043 0,049