Viroloogilised uuringud. Viroloogilised uurimismeetodid Otsesed uurimismeetodid viroloogias

Peamised viirushaiguste diagnoosimise meetodid on viiruste kasvatamine ja tuvastamine.

Haiguse viirusliku etioloogia tõestamiseks on vaja haige kala kehast viirus isoleerida, edasi anda rakukultuurile või tundlikule kalale, paljundada haigust sama või sugulasliigi tervetel kaladel, uuesti isoleerida. sama viirus katseloomadelt.

Viiruste tuvastamiseks kasutatakse mitmeid üksteist täiendavaid meetodeid: viiruse elektronmikroskoopia, selle füüsikalis-keemiliste omaduste uurimine, iseloomulike morfoloogiliste muutuste tuvastamine nakatunud rakkudes ja sümptomite tuvastamine nakatunud loomadel, mitmesugused immunoloogilised meetodid.

Viirused eraldatakse peamiselt ühekihilistel primaarsetel või siirdatud rakukultuuridel, valides igal juhul välja kultuurid, mis on antud viiruse suhtes tundlikud. Kalarakkude primaarsete kultuuride saamiseks kasutatakse kõige sagedamini emase karpkala või ristikarpkala sugunäärmeid. Sugunäärmed peaksid olema Kiselevitši skaala järgi II või II-III küpsusastmes. Sellised sugunäärmed ei sisalda palja silmaga nähtavaid mune. Vastasel juhul mõjutab munade sisu rakkude kasvu negatiivselt. Karpkala ja karpkala sugunäärmete rakukultuurid valmistatakse heakskiidetud meetodil.

Pidevate kultuuridena kasutatakse enim järgmisi rakuliine: FHM - rasvatihase sabavarre kudedest; RTG - vikerforelli sugunäärmetest; EPC – karpkala nahal tekkinud rõugekasvudest. Neid liine peetakse veterinaar- ja kalandusuuringute instituutide kalahaiguste uurimiseks spetsialiseeritud laborites, kus neid saab tellida ja vastu võtta.

Hästi uuritud viirushaiguste diagnoosimisel uuritakse elundeid ja kudesid, kuhu haigustekitaja on koondunud.

Kalahaiguste korral, mille kohta teave on ebapiisav, tehakse viroloogiline uuring enim kahjustatud elunditele. Naha ja lõpuste kaabitsad, nende elundite tükid koos limaga asetatakse steriilsetesse viaalidesse 2-3 ml steriilse soolalahuse või puhverlahusega. Proovid siseorganitest võetakse rangelt aseptilistes tingimustes.

Juhtudel, kui materjali ei ole võimalik kiiresti uurida, hoitakse seda külmkapis temperatuuril kuni 5 ° C mitte kauem kui üks päev. Külmutatud materjali saab kauem säilitada.

Uurimiseks mõeldud patoloogiline materjal purustatakse homogenisaatoris või jahvatatakse portselanmördis kvartsliivaga. Purustatud kudedest Hanki, Earli lahustes, puhvris või füsioloogilises lahuses valmistatakse 10% suspensioon ja tsentrifuugitakse 10-15 minutit kiirusel 2000-3000 p/min, supernatant imetakse pipetiga ära ja asetatakse steriilsetesse viaalidesse. Kui suspensioon ei ole steriilne, filtreeritakse valmistatud materjalid läbi membraanfiltrite pooride läbimõõduga 0,2-0,45 µm või töödeldakse antibiootikumidega (penitsilliin 1000 IU/ml ja streptomütsiin 1000 µg/ml).

Steriilses destilleeritud vees valmistatakse soolestiku sisust 20% suspensioon ja tsentrifuugitakse 10-15 minutit kiirusel 2000 p/min. Supernatanti tsentrifuugitakse uuesti kiirusel 4000-5000 p/min 30 minutit. Seejärel aspireeritakse supernatant steriilsesse viaali ja töödeldakse antibiootikumidega. 1 ml kohta lisage 1000 µg/ml streptomütsiini ja 1000 RÜ/ml penitsilliini. Segu hoitakse 2-3 tundi toatemperatuuril. Kõiki materjale testitakse bakterite steriilsuse suhtes BCH ja MPA inokuleerimisega. Valmistatud materjale kasutatakse koheselt tööks või äärmuslikel juhtudel säilitatakse külmutatud olekus (temperatuuril miinus 20 ° C).

Rakukultuuri infektsioon. Infektsiooniks kasutatakse torusid, millel on hea raku monokiht või eksplantaadi ümber kasvutsoon. Toitekeskkond imetakse ära ja igasse katseklaasi lisatakse 0,2-0,3 ml uuritavat suspensiooni. Samal ajal lisatakse katseklaasidesse 0,8-0,9 ml toitekeskkonda 2-3% seerumiga.

Igast proovist valmistatud materjal nakatatakse koekultuuriga 4-6 katseklaasis. Igast uuringute seeriast jäetakse kontrollkatseteks sama arv katseklaase, millele lisatakse 1 ml toitekeskkonda. Katseklaasid jäetakse 1-2 tunniks toatemperatuurile viiruse adsorptsiooniks rakkudele, seejärel imetakse pipetiga supernatantvedelik ära ja lisatakse algsesse mahtu toetavat toitekeskkonda.

Nakatunud ja kontrollrakukultuure inkubeeritakse temperatuuril 22–26 °C ning neid uuritakse iga päev väikese suurendusega mikroskoobi all, et tuvastada rakkudes tekkivaid morfoloogilisi muutusi. Raske raku degeneratsiooni korral aspireeritakse kultuurivedelik ja tehakse passaažid ning tsütopatogeense efekti (CPE) puudumisel tehakse kaks järjestikust passaaži. Selleks kasutada kultuurivedelikku koos korduval külmutamisel ja sulatamisel hävinud rakufraktsiooniga. Tsentrifuugitud rakumassi supernatanti kasutatakse värskete kultuuride nakatamiseks. CPP-d pärast kolmandat passaaži võetakse arvesse viirustekitaja spetsiifilise toimena.

Raku monokihi kahjustuse astet hinnatakse 4-ristisüsteemi järgi; "+" - kahjustused kuni 25%, "+ +" - kuni 50%, "+ + +" - kuni 75% ja "+ + + +" - kuni 100% monokihist.

Mõnede kalade viirushaiguste korral tekivad inklusioonikehad erinevate elundite ja kudede rakkudes (tuuma tsütoplasmas). Viiruse lisandite uurimise materjaliks on nakatunud koekultuurid, elundite ja kudede kaabid ja määrded-jäljed, näidatud materjalid fikseeritakse enne värvimist üldtunnustatud meetoditel, kasutades Dubosque-Brazil-Bouena, Bouena, Carnoy vedelikke või 10% neutraalse formaliini lahus.

Viiruse lisandid värvitakse erinevate meetoditega: Muromtsevi järgi rubiin, Mann, Sellex, Klisenko, Romanovsky-Giemsa, May-Grunald-Giemsa jne.

Viiruse tiitrimine- viiruse aktiivsuse kvantitatiivne määramine. Viiruse tiitrit väljendatakse viiruse suspensiooni mahuühikus sisalduvate nakkuslike ühikute arvuna. Viiruse nakkavaks ühikuks peetakse sellist annust, mis põhjustab nakatumist 50% viirusega nakatunud vastuvõtlikest objektidest. Seda viiruse annust nimetatakse nakkavaks ja tähistatakse ID50-ga.

Rakukultuure kasutatakse peamiselt kalaviiruste tiitrimisel tundlike objektidena. Tiitrimine rakukultuuris toimub vastavalt viiruste tsütopatogeensele toimele. Sel juhul nimetatakse ID 50 koe tsütopatogeenseks annuseks (TCD 50) ja viiruse tiitrit väljendatakse TCD 50 kogusena 1 ml viirussuspensioonis. Viiruse tiiter määratakse lõpliku lahjendusmeetodiga. Selle meetodi kohaselt süstitakse tundlikesse rakukultuuridesse teatud kogus viirussuspensiooni järjest suurenevates lahjendustes ja, võttes arvesse iga süstimise tulemust positiivsena (kui CPE on olemas) või negatiivsena, kui CPE puudub, määratakse viiruse lõpp-punkt. tiitrimine arvutatakse – 1 TCD 50 .

Selge CPP-d andvate viiruste tiitrimiseks kasutatakse ka naastude meetodit. Samal ajal valatakse viirusega nakatunud rakkude monokiht toitesöötme seguga agariga, et vältida viiruse ülekandumist teistele rakkudele, mis asuvad esmaselt nakatunud rakkudest oluliselt eemal, ja et oleks võimalik nakatada esialgseid nakatunud rakke. naastude infektsioonikolded).

Iga naast pärineb ühest nakkuslikust ühikust, mida tähistatakse PFU-ks (plaque-forming unit), ja viiruse tiitrit väljendatakse PFU-de arvuna suspensiooni mahuühiku kohta.

Neutraliseerimisreaktsioon(PH) rakukultuuris.

Reaktsioon põhineb antigeeni sidumisel homoloogse antiseerumi antikehade poolt. Reaktsiooni kasutatakse patogeenide tuvastamiseks viirusliku etioloogiaga haiguste diagnoosimisel. See võimaldab teadaolevate antikehade abil määrata tundmatu viiruse antigeeni või teadaoleva (standard)antigeeni abil – tundmatuid antikehi haigete või tervenenud kalade seerumis.

Isoleeritud viiruse määramine neutraliseerimisreaktsioonis viiakse läbi nendega homoloogsete antigeenide (viiruste) diagnostiliste hüperimmuunsete antiseerumite (antikehade) abil.

Hüperimmuunsed antiseerumid saadakse laboriloomade (näiteks küüliku) nakatamisel teadaolevate kalahaigusi põhjustavate viirustüvedega. Saadud antiseerumid määravad kindlaks spetsiifiliste antikehade tiitrid. Tööks võetakse kõrge tiitriga antikehi sisaldavad antiseerumid.

Reaktsiooni järjekord.

1. Normaalse ja hüperimmuunse seerumi inaktiveerimine kuumutamisel 56°C juures 30 minutit.

2. Reaktsiooni koostisosade lahjenduste valmistamine. Antigeen ja seerum lahjendatakse ilma seerumita ja antibiootikumideta toitesöötmega, alates 1:5, 1:50, 1:500 ja kuni saadakse lahjendus, mille sisaldus on alla 1 TCD 50 / 0,2 ml. Hüperimmuunseerumit lahjendatakse suhtega 1: 2 või 1: 5. Madala tiitri korral kasutatakse seerumit lahjendamata kujul. Tavalist seerumit lahjendatakse samamoodi nagu hüperimmuunset seerumit.

3. Reaktsiooni avaldus. Kolm rida steriilseid katseklaase asetatakse riiulile. Esimesse ritta valatakse lahjendatud hüperimmuunseerum, teise lahjendatud tavaline seerum ja kolmandasse toitekeskkond. Iga koostisosa lisatakse 0,5 ml mahus.

Viiruse valmistatud lahjendused kantakse 0,5 ml-s iga kolme rea vastavatesse katseklaasidesse ja iga I lahjenduse viirus kantakse eraldi pipetiga, alustades kõrgeimast lahjendusest. Seega saadakse igas torude reas viiruse 10-kordsed lahjendused: 10-1, 10-2 jne.

Seerumite toksilisuse kontrollimiseks lisatakse eraldi katsutisse 0,5 ml hüperimmuunseerumi ettevalmistatud lahjendust ja seejärel võrdne kogus toitekeskkonda. Sama tehakse ka tavalise seerumiga.

Loksutage tuube segudega põhjalikult ja inkubeerige toatemperatuuril 1 tund. Seejärel nakatage rakukultuur iga viiruse lahjendusega (0,2 ml tuubi kohta) hüperimmuunse normaalse seerumi ja toitekeskkonnaga, 4 rakukultuuri katsutit. Paralleelselt kontrollige kasutatud rakkude toksilisust ja kontrollige rakukultuuri proove.

Rakukultuuriga torusid inkubeeritakse termostaadis selle viiruse paljunemiseks optimaalsel temperatuuril ja neid uuritakse iga päev väikese suurendusega mikroskoobi all, et tuvastada viiruse CPE. Tulemused kantakse tabelisse (tabel 11).

Viiruse tiiter väljendatakse nakkuslike ühikute arvuna, mis sisalduvad viiruse suspensiooni mahuühikus. Leidke neutraliseerimisindeks (IN). See vastab maksimaalsele ID50 kogusele, mida saab neutraliseerida hüperimmuunseerumiga. IN arvutamine toimub järgmise valemiga: lgIN = lgT 1 -lgT 2 kus T 1 - viiruse tiiter normaalse seerumi juuresolekul; T 2 - viiruse tiiter hüperimmuunseerumi juuresolekul. IN väärtus leitakse antilogaritmide tabelist. IN väärtust kuni 10 peetakse tavaks negatiivseks, 10 kuni 49 - kahtlane, 50 või rohkem - positiivseks tulemuseks.

Reaktsiooni tulemusi võib pidada usaldusväärseks ainult siis, kui hüperimmuunseerumi spetsiifilist neutraliseerivat aktiivsust testitakse. Selleks määrake eelnevalt neutraliseerivate antikehade tiiter selles seerumis või selle neutraliseerimisindeks reaktsioonis homoloogse viirusega.

Rabdoviiruste naastude eraldamine. See meetod on spetsiifiline, seda kasutatakse karpkala ja forelli rabdoviiruste isoleerimiseks, esialgseks tüpiseerimiseks ja selekteerimiseks spetsiifiliste immuunseerumite juuresolekul viiruse tuvastamiseks.

Viiruse juuresolekul uuritavas materjalis moodustuvad agariga kaetud rakukultuurides ümarad kolooniad (naastud).

Aseptilistes tingimustes kogutakse Pasteuri pipetiga neerude, maksa, põrna kude ja kõhuõõnde vedelik, mis viiakse viaali söötmega, mis sisaldab 500 RÜ (μg) / ml antibiootikume vahekorras 1:10. inkubeeriti 60–90 minutit temperatuuril 18–22 °C, seejärel tsentrifuugiti kiirusel 2–3 tuhat pööret minutis 10 minutit. Supernatant lahjendatakse toitainekeskkonnaga 1:10 (lahjendus 1:100). Rakukultuuride nakatamiseks kasutatakse supernatantide mõlemat lahjendust.

Uuringu jaoks valitakse 3-päevane pidev rakukultuur, mida kasvatatakse täpselt määratletud ühekihilise kihiga madratsites kiirusega 2 madratsit iga patoloogilise materjali lahjenduse kohta ja 2 madratsit kontrolliks. Toitekeskkond eemaldatakse viaalidest ja lisatakse 2 ml looteseerumita söödet. Seejärel lisatakse 0,2 ml uuritud patoloogilist materjali ja jäetakse viiruse adsorptsiooniks 60 minutiks kala nakatavate viiruste jaoks optimaalsel temperatuuril (karpkala viiruste puhul - 24-26 ° C ja forelli viiruste korral - 16-18 ° C ).

Kontroll pandi 2 madratsisse 0,2 ml rakukultuuridega, mis sisaldasid 100 TCD 50 /ml teadaolevat viirust ja 2–0,2 ml viiruseta toitekeskkonda.

60 minuti pärast eemaldatakse viaalidest vedelik. Monokihi vastas olevale seinale asetatakse 50 ml viaali 5 ml agarkatet, mis on kuumutatud temperatuurini 40–42 °C (HCV viiruse eraldamisel - mitte üle 38 °C). Madratsid on keeratud ühekihiliselt allapoole, kaetud musta paberiga. 15-20 minuti pärast viiakse madratsid inkubeerimiseks uuritud viiruste jaoks optimaalsel temperatuuril. Madratsid on laotud agarkattega pool ülespoole. Tundmatu viirusega hoitakse kultuure kahel temperatuuril - 14-18 ja 22-24°C.

Nakatunud rakukultuure vaadeldakse valgel taustal. Kui rakukultuuris on uuritavas materjalis viirus, tekivad kõigepealt kultuuri roosakas-mati taustal läbipaistvad täpid. Tulevikus suureneb nende suurus, moodustades ümmargused läbipaistvad kolooniad - naastud, mille olemasolu näitab rabdoviiruste esinemist patoloogilises materjalis.

Pasteuri pipetiga kogutakse kahjustatud ja mõjutamata osade piirile tükike hambakatu nii, et sinna ei satuks mitte ainult agar, vaid ka rakukiht. Valitud tükk asetatakse katseklaasi koos 1 ml kasvusöötmega, külmutatakse temperatuuril miinus 20 °C ja inkubeeritakse 60 minutit. Suure hulga naastude korral (kogu rakukiht on läbipaistev) korratakse uuringuid lahjendustes 10 -3 ja 10 -4.

3-8 mm läbimõõduga karpkala rabdoviiruse naastud EPC ja FHM pideval kultuuril, mida inkubeeritakse temperatuuril 24-26°C, tekivad 4.-7. päeval.

Naastude puudumisel ja CPD esinemisel rakukultuurides viiakse viirust sisaldava kultuurivedeliku täiendavad uuringud läbi lahjendustes 10-2-10-3 (2-3 passaaži). Täiendavate viiruste tuvastamise meetoditena kasutatakse: fluorestseeruvate antikehade meetodit; viiruse tundlikkuse määramine kloroformi, eetri, pH väärtuse, kuumutamise suhtes; viiruse morfoloogia elektronmikroskoopiline uuring.

Viroloogilised uuringud hõlmavad kahte peamist etappi: viiruste eraldamine ja nende tuvastamine. Viroloogiliste uuringute materjaliks võib olla veri, muud bioloogilised ja patoloogilised vedelikud, elundite ja kudede biopsiad.

Arboviiruse infektsioonide diagnoosimiseks tehakse sageli viroloogilist vereanalüüsi. Süljes saab tuvastada marutaudi, mumpsi, herpes simplex viiruseid.Ninaneelu tampooniga eraldatakse gripi ja teiste ägedate hingamisteede viirusnakkuste, leetrite, patogeenid. Konjunktiivi pesemisel leitakse adenoviirused. Väljaheitest eraldatakse erinevaid entero-, adsno-, pso-, nora- ja rotaviirusi.

Viiruste isoleerimiseks kasutatakse rakukultuure, kanaembrüoid ja mõnikord ka laboriloomi.

Enamik patogeenseid viiruseid on koe- ja tüübispetsiifilised, näiteks polioviirus paljuneb ainult primaatide rakkudes, seega kasutatakse konkreetse viiruse eraldamiseks sobivat koekultuuri. Tundmatu patogeeni isoleerimiseks on soovitav nakatada samaaegselt 3-4 rakukultuuri, eeldades, et üks neist võib olla tundlik. Viiruse esinemise nakatunud rakukultuurides määrab spetsiifilise raku degeneratsiooni areng, s.t. tsütopatogeenne toime, intratsellulaarsete inklusioonide tuvastamine, samuti spetsiifilise antigeeni tuvastamine immunofluorestsentsi, positiivsete hemadsorptsiooni ja hemaglutinatsiooni reaktsioonide alusel.

Halvasti diferentseerunud kudedega linnuembrüod sobivad paljude viiruste kasvatamiseks. Vestlemiseks kasutage lihtsalt kana embrüoid. Embrüodes paljunemisel võivad viirused põhjustada nende surma (arboviirused), muutuste ilmnemist koorioni-allantoismembraanis (rõugeviirused) või embrüo kehas, temag glutinino kogunemist embrüo vedelikesse (gripp, mumpsi viirused). ) ja siduva viirusantigeeni komplement.

Viiruste identifitseerimine toimub immunoloogiliste meetodite abil: hemaglutinatsiooni inhibeerimise reaktsioon, komplemendi sidumine, neutraliseerimine, geeli sadestamine, immunofluorestsents.

Veel teemal Viroloogiline meetod:

Peamiste antropomeetriliste andmete hindamine parameetrilise meetodiga (sigma meetod)
Tingimuslik väljasuremisravi ja sundtreeningu meetod
2. Võrdlev õigusmeetod - õigusteaduse erateaduslik meetod
KAASAEGSED DIAGNOOSI MEETODID JA LAMAALUSE EMAKA MÜOMAA RAVIMEETODI VALIK
5.4. Üldise uurimismeetodi kui praktilise tegevuse meetodi mõiste ja struktuur
Teema 8. MIKROBIOLOOGILISED MEETODID MUUTUVUSE UURIMISEKS JA PÄRILIKU TEABE EDAKENDAMISE MEHHANISMID. GENEETILISTE MEETODITE RAKENDAMINE UUTE RAVIMI LOOMISEKS
Teema 15. MIKROORGANISMIDE PATOGEENSUS JA VIRULENTSUS. VIRULENTSUSTEgurid. LABORILOOMADE NAKKUMISVIISID. ANTIGEENID, NENDE SAAMISE MEETODID. ANTIKEHAD. IMMUUNREAKTSIOONID JA NENDE PRAKTILINE KASUTAMINE. FAGOTSÜTOOS

Viroloogilised uurimismeetodid

meetodid viiruste bioloogia uurimiseks ja nende tuvastamiseks. Viroloogias kasutatakse laialdaselt molekulaarbioloogia meetodeid, mille abil oli võimalik kindlaks teha viirusosakeste molekulaarstruktuur, kuidas need rakku tungivad ja viiruste paljunemise tunnused, viiruslike nukleiinhapete esmane struktuur. ja valgud. Arendatakse meetodeid viiruslike nukleiinhapete ja valkude aminohapete koostisosade järjestuse määramiseks. Võimalik on siduda nukleiinhapete ja nende poolt kodeeritud valkude funktsioone nukleotiidjärjestusega ning selgitada välja rakusiseste protsesside põhjused, mis mängivad olulist rolli viirusnakkuse patogeneesis.

Nakatunud rakukultuurides saab seda tuvastada raku morfoloogia muutuse, tsütopaatilise toime, mis võib olla spetsiifiline, inklusioonide ilmnemise, viiruse antigeenide määramise järgi rakus ja kultuurivedelikus; viiruse järglaste bioloogiliste omaduste määramine kultuurivedelikus ja viiruste tiitrimine koekultuuris, tibude embrüote või tundlike loomade puhul; tuvastades rakkudes üksikuid viirusnukleiinhappeid molekulaarse hübridisatsiooni või nukleiinhapete klastrite abil tsütokeemilise meetodiga, kasutades fluorestsentsmikroskoopiat.

Viiruste eraldamine on töömahukas ja pikk protsess. Seda tehakse elanikkonna seas ringleva viiruse tüübi või variandi väljaselgitamiseks (näiteks gripiviiruse serovariandi, poliomüeliidi viiruse metsik- või vaktsiinitüve jms tuvastamiseks); juhtudel, kui on vaja võtta kiireloomulisi epidemioloogilisi meetmeid; kui ilmnevad uued viiruste tüübid või variandid; vajadusel kinnitage esialgne diagnoos; viiruste näitamiseks keskkonnaobjektides. Viiruste isoleerimisel võetakse arvesse nende püsimise võimalust inimkehas, samuti kahe või enama viiruse põhjustatud seganakkuse esinemist. Ühest virionist saadud viiruse geneetiliselt homogeenset populatsiooni nimetatakse viiruse klooniks ja selle saamise protsessi nimetatakse kloonimiseks.

Viiruste, vastuvõtlike laboriloomade isoleerimiseks kasutatakse kana embrüoid, kuid kõige sagedamini kasutatakse koekultuuri. Viiruse olemasolu määrab tavaliselt spetsiifiline raku degeneratsioon (tsütopaatiline toime), sümplastide ja süntsüütide moodustumine, rakusiseste inklusioonide tuvastamine, samuti spetsiifiline antigeen, mis tuvastatakse immunofluorestsentsi, hemadsorptsiooni, hemaglutinatsiooni (hemaglutineerivates viirustes) jne abil. . Neid märke saab tuvastada alles pärast 2-3 viiruse läbimist.

Mitmete viiruste, nagu gripiviirused, isoleerimiseks kasutatakse kana embrüoid, mõnede Coxsackie viiruste ja mitmete arboviiruste isoleerimiseks kasutatakse vastsündinud hiiri. Isoleeritud viiruste tuvastamine toimub seroloogiliste testide ja muude meetodite abil.

Viirustega töötamisel määratakse nende tiiter. Viiruste tiitrimine toimub tavaliselt koekultuuris, määrates viirust sisaldava vedeliku suurima lahjenduse, mille juures kuded tekivad, ja moodustuvad ka viirusspetsiifilised. Naastude meetodit saab kasutada mitmete viiruste tiitrimiseks. Naastud või negatiivsed viiruste kolooniad on agarkatte all oleva ühekihilise koekultuuri viiruse poolt hävitatud rakkude kolded. Kolooniate loendamine võimaldab kvantifitseerida viiruste nakkuslikku aktiivsust selle põhjal, et üks nakkav viirusosake moodustab ühe naastu. Naastud tuvastatakse, värvides kultuuri elutähtsate värvainetega, tavaliselt neutraalse punasega; naastud ei adsorbeeri värvainet ja on seetõttu nähtavad heledate laikudena määrdunud elusrakkude taustal. väljendatud naastude moodustavate ühikute arvuna 1-s ml.

Viiruste puhastamine ja kontsentreerimine viiakse tavaliselt läbi diferentsiaalse ultratsentrifuugimisega, millele järgneb tsentrifuugimine kontsentratsiooni- või tihedusgradientide järgi. Viiruste puhastamiseks kasutatakse immunoloogilisi meetodeid, ioonvahetuskromatograafiat, immunosorbente jne.

Viirusnakkuste laboratoorne diagnostika hõlmab patogeeni või selle komponentide tuvastamist kliinilises materjalis; selle materjali viirus; serodiagnoos. Laboratoorse diagnostika meetodi valik sõltub igal üksikjuhul haiguse iseloomust, haiguse perioodist ja labori võimalustest. Kaasaegsed viirusinfektsioonid põhinevad ekspressmeetoditel, mis võimaldavad teil saada vastuse mõne tunni jooksul pärast kliinilise materjali võtmist haiguse varases staadiumis, sealhulgas elektrooniline ja immuunelektrooniline, samuti molekulaarse hübridisatsiooni meetod, antikehade tuvastamine. lgM klass jne.

Negatiivselt värvunud viiruste elektronmikroskoopia võimaldab viiruseid eristada ja nende kontsentratsiooni määrata. Elektronmikroskoopia kasutamine viirusnakkuste diagnoosimisel on piiratud juhtudel, kui viirusosakeste arv kliinilises materjalis on piisavalt suur (10 5:1). ml ja kõrgem). Meetodi puuduseks on võimetus teha vahet samasse taksonoomilisse rühma kuuluvate viiruste vahel. See puudus kõrvaldatakse immuunelektronmikroskoopia abil. Meetod põhineb immuunkomplekside moodustumisel, kui viirusosakestele lisatakse spetsiifilist seerumit, samal ajal toimub viirusosakeste samaaegne kontsentratsioon, mis võimaldab neid tuvastada. Meetodit kasutatakse ka antikehade tuvastamiseks. Ekspressdiagnostika eesmärgil viiakse läbi koeekstraktide, väljaheidete, vedeliku ja ninaneelu saladuste elektronmikroskoopiline uurimine. Viiruse morfogeneesi uurimiseks kasutatakse laialdaselt elektronmikroskoopiat, selle võimalusi laiendatakse märgistatud antikehade kasutamisega.

Molekulaarse hübridisatsiooni meetod, mis põhineb viirusspetsiifiliste nukleiinhapete tuvastamisel, võimaldab tuvastada geenide üksikuid koopiaid ja sellele pole tundlikkuse poolest võrdset. mis põhineb komplementaarsete ahelate ehk RNA (sondide) hübridisatsioonil ja kaheahelaliste struktuuride moodustumisel. Odavaim sond on kloonitud rekombinantne DNA. märgistatud radioaktiivsete lähteainetega (tavaliselt radioaktiivse fosforiga). Kolorimeetriliste reaktsioonide kasutamine on paljutõotav. Molekulaarsel hübridisatsioonil on mitu varianti: punkthübridisatsioon, blothübridisatsioon, sandwich-hübridisatsioon, in situ jne.

Klassi lgM antikehad tekivad varem kui klassi G (3-5. haiguspäeval) ja kaovad mõne nädala pärast, seega viitab nende avastamine hiljutisele infektsioonile. IgM klassi antikehad tuvastatakse immunofluorestsentsi või ensüümi immuunanalüüsiga, kasutades anti-μ antiseerumit (anti-IgM raske ahela seerumid).

Seroloogilised meetodid viroloogias põhinevad klassikalistel immunoloogilistel reaktsioonidel (vt Immunoloogilised uurimismeetodid) : komplemendi sidumise reaktsioonid, hemaglutinatsiooni pärssimine, bioloogiline neutraliseerimine, immunodifusioon, kaudne hemaglutinatsioon, radiaalne hemolüüs, immunofluorestsents, ensüümi immunoanalüüs, radioimmunoanalüüs. Paljude reaktsioonide jaoks on välja töötatud mikromeetodid ja nende tehnikaid täiustatakse pidevalt. Neid meetodeid kasutatakse viiruste tuvastamiseks teadaolevate seerumite komplekti abil ja serodiagnostikaks, et määrata antikehade suurenemine teises seerumis võrreldes esimesega (esimene seerum võetakse esimestel päevadel pärast haigust, teine - pärast haigust). 2-3 nädalat). Diagnostiline väärtus ei ole väiksem kui neljakordne antikehade suurenemine teises seerumis. Kui lgM klassi antikehade tuvastamine viitab hiljutisele infektsioonile, siis lgC klassi antikehad püsivad mitu aastat ja mõnikord kogu elu.

Viiruste individuaalsete antigeenide ja nende vastaste antikehade tuvastamiseks keerulistes segudes ilma eelneva valgu puhastamiseta kasutatakse immunoblotimist. Meetod ühendab valgu fraktsioneerimise, kasutades polüakrüülamiidgeelelektroforeesi ja sellele järgnevat valkude immunoanalüüsi ensüümi immuunanalüüsiga. Valkude eraldamine vähendab nõudeid antigeeni keemilisele puhtusele ja võimaldab tuvastada üksikuid paare - antikehi. See ülesanne on asjakohane näiteks HIV-nakkuse serodiagnostikas, kus ensüümi immuunanalüüsi valepositiivsed reaktsioonid on tingitud rakuantigeenide vastaste antikehade olemasolust, mis esinevad viirusvalkude ebapiisava puhastamise tulemusena. antikehad patsientide seerumis sisemiste ja väliste viiruseantigeenide suhtes võimaldavad teil määrata haiguse staadiumi ja populatsioonide analüüsimisel - viirusvalke. Immunoblotimist HIV-nakkuse korral kasutatakse kinnitava testina üksikute viirusantigeenide ja nendevastaste antikehade tuvastamiseks. Populatsioonide analüüsimisel kasutatakse meetodit viirusvalkude varieeruvuse määramiseks. Meetodi suur väärtus seisneb võimaluses analüüsida rekombinantse DNA tehnoloogia abil sünteesitud antigeene, teha kindlaks nende suurus ja antigeensete determinantide olemasolu.

Bibliograafia: Bukrinskaya A.G. , M., 1986; Viroloogia, meetodid, toim. B. Meikhi, . inglise keelest, M., 1988; Mikrobioloogiliste ja viroloogiliste uurimismeetodite käsiraamat, toim. M.O. Birger, M., 1982.

1. Väike meditsiinientsüklopeedia. - M.: Meditsiiniline entsüklopeedia. 1991-96 2. Esmaabi. - M.: Suur vene entsüklopeedia. 1994 3. Meditsiiniterminite entsüklopeediline sõnastik. - M.: Nõukogude entsüklopeedia. - 1982-1984.

Vaadake, millised on "viroloogilised uurimismeetodid" teistes sõnaraamatutes:

Nende eesmärk on viiruste tuvastamine, nende tuvastamine (identifitseerimine) ja bioloogiliste omaduste uurimine. Viiruste (vt Viirused) isoleerimiseks inimestelt, loomadelt ja taimedelt viiakse testitav materjal viirustele vastuvõtlike inimeste kehasse ... ... Suur Nõukogude entsüklopeedia

VIROLOOGILISED UURINGUD- viroloogilised uuringud, uurimismeetodite kogum, mis võimaldab tuvastada viirushaiguse etioloogiat ja uurida selle patogeeni V. ja. on viiruse eraldamine haigetest ja surnud loomadest (võtt, konserveerimine ... Veterinaarentsüklopeediline sõnaraamat

LABORATOORNE UURIMUS- LABORATOORNE UURIMUS. vt LABORATOORIUMISED UURINGUD. Usaldusväärsete uurimistulemuste saamise olulisim tingimus on analüüsiobjektide õige valik, õigeaegne valik ja uurimisprobleemi sõnastamine. Proovivõtureeglid… Kalahaigused: käsiraamat

Tervishoiusüsteemi asutused või meditsiini- ja ennetus- või sanitaarasutuste struktuuriüksused, mis on ette nähtud mitmesugusteks meditsiinilisteks uuringuteks. Sellesse rühma ei kuulu teaduslikud ...... Meditsiiniline entsüklopeedia

I Epidemioloogia (epideemia + kreeka logose doktriin) on teadus, mis uurib epideemiaprotsessi mustreid ja töötab välja meetmeid inimeste nakkushaiguste vastu võitlemiseks. Ajalooliselt on E. kujunenud teaduslikuks distsipliiniks, mille uurimisobjektiks on ... ... Meditsiiniline entsüklopeedia

I Viroloogia (viirused [s] (Viruses) + kreeka logose doktriin) on biomeditsiiniteadus, mis uurib viirusi. See tekkis 19. sajandi lõpus, kui vene teadlane D.I. Ivanovsky (1892) tegi esmakordselt kindlaks väikseimate mikroorganismide olemasolu, mis põhjustavad ... ... Meditsiiniline entsüklopeedia

- (sünonüümid: puukentsefalomüeliit, kevadsuvine entsefaliit, kevadsuvine meningoentsefaliit, taiga entsefaliit, vene Kaug-Ida entsefaliit) nakkushaigus, mida iseloomustab palavik, joobeseisund ja valdav kahjustus ... ... Meditsiiniline entsüklopeedia

Viroloogilised uurimismeetodid põhinevad ka immunoloogilistel protsessidel (antigeeni interaktsioon antikehadega), viiruse bioloogilistel omadustel (hemaglutinatsioonivõime, hemolüüs, ensümaatiline aktiivsus), viiruse ja peremeesraku interaktsiooni tunnustel (tsütopaatilise raku olemus). mõju, intratsellulaarsete lisandite teke jne) .

Viirusnakkuste diagnoosimisel, viiruste kasvatamisel, isoleerimisel ja identifitseerimisel, samuti vaktsiinipreparaatide valmistamisel kasutatakse laialdaselt koe- ja rakukultuuri meetodit. Kasutatakse primaarseid, sekundaarseid, stabiilseid pidevaid ja diploidseid rakukultuure. Primaarsed kultuurid saadakse kudede dispergeerimisel proteolüütiliste ensüümidega (trüpsiin, kollagenaas). Rakkude allikaks võivad olla inimese ja looma embrüote koed ja elundid (sagedamini neerud). Rakkude suspensioon toitekeskkonnas asetatakse nn madratsitesse, pudelitesse või Petri tassidesse, kus pärast anuma pinnale kinnitumist hakkavad rakud paljunema. Viirusnakkuse korral kasutatakse tavaliselt raku monokihti. Toitevedelik kurnatakse, viirussuspensioon sisestatakse teatud lahjendustes ja pärast kokkupuudet rakkudega lisatakse värske toitainekeskkond, tavaliselt ilma seerumita.

Enamiku primaarsete kultuuride rakke saab subkultuurida ja neid nimetatakse sekundaarseteks kultuurideks. Rakkude edasisel läbimisel moodustub kiireks paljunemiseks võimeline fibroblastitaoliste rakkude populatsioon, millest enamik säilitab algse kromosoomikomplekti. Need on niinimetatud diploidsed rakud. Rakkude seeriaviljelusel saadakse stabiilsed pidevad rakukultuurid. Passaažide käigus ilmuvad kiiresti jagunevad homogeensed rakud heteroploidse kromosoomikomplektiga. Stabiilsed rakuliinid võivad olla ühekihilised ja suspensioonid. Ühekihilised kultuurid kasvavad pideva kihina klaasi pinnal, suspensioonkultuurid kasvavad suspensioonidena erinevates anumates segistite abil. Seal on üle 400 rakuliini, mis pärinevad 40 erinevast loomaliigist (sh primaadid, linnud, roomajad, kahepaiksed, kalad, putukad) ja inimestelt.

Üksikute elundite ja kudede tükke (elundikultuure) saab kasvatada kunstlikus toitekeskkonnas. Seda tüüpi kultuurid säilitavad koe struktuuri, mis on eriti oluline selliste viiruste isoleerimiseks ja läbipääsuks, mis ei paljune diferentseerumata koekultuurides (näiteks koroonaviirused).

Nakatunud rakukultuurides saab viirusi tuvastada raku morfoloogia muutuse, tsütopaatilise toime, mis võib olla spetsiifiline, inklusioonide ilmnemise, viiruse antigeenide määramise järgi rakus ja kultuurivedelikus; viiruse järglaste bioloogiliste omaduste määramine kultuurivedelikus ja viiruste tiitrimine koekultuuris, tibude embrüote või tundlike loomade puhul; tuvastades rakkudes üksikuid viirusnukleiinhappeid molekulaarse hübridisatsiooni või nukleiinhapete klastrite abil tsütokeemilise meetodiga, kasutades fluorestsentsmikroskoopiat.

Viiruste isoleerimiseks kasutatakse vastuvõtlike laboriloomade nakatumist, kana embrüoid, kuid kõige sagedamini kasutatakse koekultuuri. Viiruse olemasolu määrab tavaliselt spetsiifiline raku degeneratsioon (tsütopaatiline toime), sümplastide ja süntsüütide moodustumine, rakusiseste inklusioonide tuvastamine, samuti spetsiifiline antigeen, mis tuvastatakse immunofluorestsentsi, hemadsorptsiooni, hemaglutinatsiooni (hemaglutineerivates viirustes) jne abil. . Neid märke saab tuvastada alles pärast 2-3 viiruse läbimist.

Viirustega töötamisel määratakse nende tiiter. Viiruste tiitrimine toimub tavaliselt koekultuuris, määrates viirust sisaldava vedeliku kõrgeima lahjenduse, mille korral toimub kudede degeneratsioon, moodustuvad kandmised ja viirusspetsiifilised antigeenid. Naastude meetodit saab kasutada mitmete viiruste tiitrimiseks. Naastud või negatiivsed viiruste kolooniad on agarkatte all oleva ühekihilise koekultuuri viiruse poolt hävitatud rakkude kolded. Kolooniate loendamine võimaldab kvantitatiivselt analüüsida viiruste nakkuslikku aktiivsust selle põhjal, et üks nakkav viirusosake moodustab ühe naastu. Naastud tuvastatakse, värvides kultuuri elutähtsate värvainetega, tavaliselt neutraalse punasega; naastud ei adsorbeeri värvainet ja on seetõttu nähtavad heledate laikudena määrdunud elusrakkude taustal. Viiruse tiitrit väljendatakse naastude moodustavate ühikute arvuna 1-s ml.

Viirusnakkuste laboratoorne diagnostika hõlmab patogeeni või selle komponentide tuvastamist kliinilises materjalis; viiruse isoleerimine sellest materjalist; serodiagnoos. Laboratoorse diagnostika meetodi valik sõltub igal üksikjuhul haiguse iseloomust, haiguse perioodist ja labori võimalustest. Viirusnakkuste kaasaegne diagnostika põhineb ekspressmeetoditel, mis võimaldavad saada vastuse mõne tunni jooksul pärast kliinilise materjali võtmist haiguse varases staadiumis, sealhulgas elektron- ja immuunelektronmikroskoopia, aga ka immunofluorestsents ehk molekulaarse hübridisatsiooni meetod. , IgM klassi antikehade tuvastamine jne.

Negatiivselt värvunud viiruste elektronmikroskoopia võimaldab viiruseid eristada ja nende kontsentratsiooni määrata. Elektronmikroskoopia kasutamine viirusnakkuste diagnoosimisel on piiratud juhtudel, kui viirusosakeste kontsentratsioon kliinilises materjalis on piisavalt kõrge (10 5:1). ml ja kõrgem). Meetodi puuduseks on võimetus teha vahet samasse taksonoomilisse rühma kuuluvate viiruste vahel. See puudus kõrvaldatakse immuunelektronmikroskoopia abil. Meetod põhineb immuunkomplekside moodustamisel, kui viirusosakestele lisatakse spetsiifilist seerumit, samal ajal toimub viirusosakeste samaaegne kontsentratsioon, mis võimaldab neid tuvastada. Meetodit kasutatakse ka antikehade tuvastamiseks. Ekspressdiagnostika eesmärgil viiakse läbi koeekstraktide, väljaheidete, vesiikulite vedeliku ja ninaneelu sekretsiooni elektronmikroskoopiline uurimine. Viiruse morfogeneesi uurimiseks kasutatakse laialdaselt elektronmikroskoopiat, selle võimalusi laiendatakse märgistatud antikehade kasutamisega.

Molekulaarse hübridisatsiooni meetod, mis põhineb viirusspetsiifiliste nukleiinhapete tuvastamisel, võimaldab tuvastada geenide üksikuid koopiaid ja sellele pole tundlikkuse poolest võrdset. Reaktsioon põhineb DNA või RNA komplementaarsete ahelate (sondide) hübridisatsioonil ja kaheahelaliste struktuuride moodustumisel. Odavaim sond on kloonitud rekombinantne DNA. Sond on märgistatud radioaktiivsete lähteainetega (tavaliselt radioaktiivse fosforiga). Kolorimeetriliste reaktsioonide kasutamine on paljutõotav. Molekulaarsel hübridisatsioonil on mitu varianti: punkthübridisatsioon, blothübridisatsioon, sandwich-hübridisatsioon, in situ hübridisatsioon jne.

LgM-klassi antikehad tekivad varem kui G-klassi antikehad (3-5. haiguspäeval) ja kaovad mõne nädala pärast, seega viitab nende avastamine hiljutisele infektsioonile. IgM klassi antikehad tuvastatakse immunofluorestsentsi või ensüümi immuunanalüüsi abil, kasutades anti-μ antiseerumit (anti-IgM raske ahela seerumid).

Viiruste individuaalsete antigeenide ja nende vastaste antikehade tuvastamiseks keerulistes segudes ilma eelneva valgu puhastamiseta kasutatakse immunoblotimist. Meetod ühendab valgu fraktsioneerimise, kasutades polüakrüülamiidgeelelektroforeesi ja sellele järgnevat valkude immunoanalüüsi ensüümi immuunanalüüsiga. Valkude eraldamine vähendab nõudeid antigeeni keemilisele puhtusele ja võimaldab tuvastada üksikuid antigeen-antikeha paare. See ülesanne on asjakohane näiteks HIV-nakkuse serodiagnostikas, kus ensüümi immuunanalüüsi valepositiivsed reaktsioonid on tingitud rakuantigeenide vastaste antikehade olemasolust, mis esinevad viirusvalkude ebapiisava puhastamise tulemusena. Antikehade tuvastamine patsientide seerumis sisemiste ja väliste viirusantigeenide suhtes võimaldab määrata haiguse staadiumi ning populatsioonide analüüsimisel - viirusvalkude varieeruvust. Immunoblotimist HIV-nakkuse korral kasutatakse kinnitava testina üksikute viirusantigeenide ja nendevastaste antikehade tuvastamiseks. Populatsioonide analüüsimisel kasutatakse meetodit viirusvalkude varieeruvuse määramiseks. Meetodi suur väärtus seisneb võimaluses analüüsida rekombinantse DNA tehnoloogia abil sünteesitud antigeene, teha kindlaks nende suurus ja antigeensete determinantide olemasolu.

Bibliograafia: Bukrinskaya A.G. Virology, M., 1986; Viroloogia, meetodid, toim. B. Meikhi, tlk. inglise keelest, M., 1988; Mikrobioloogiliste ja viroloogiliste uurimismeetodite käsiraamat, toim. M.O. Birger, M., 1982.

- meetodid orgaanilisi aineid sisaldavate jäätmete neutraliseerimiseks, mis põhinevad nende kuumutamisel termofiilsete aeroobsete mikroorganismide elulise aktiivsuse tagajärjel ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- histokeemilised meetodid ensüümide tuvastamiseks, mis põhinevad kaltsium- või magneesiumfosfaadi sademete moodustumise reaktsioonil ensümaatilise aktiivsuse lokaliseerimisel koelõikude inkubeerimisel orgaanilise ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- meetodid histiotsüütide tuvastamiseks närvikoe ja erinevate organite preparaatides, kasutades hõbeda ammoniaak või püridiin-sooda lahuseid ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- pärilikkuse olemust puudutavate eelduste hindamise meetodid, mis põhinevad haigete ja tervete inimeste täheldatud ja eeldatavate suhtarvude võrdlusel pärilike haigustega koormatud peredes, võttes arvesse meetodit ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- kasutatakse inimeste, loomade ja taimede rakkude ja kudede struktuuri ja funktsiooni uurimiseks normaalsetes, patoloogilistes ja katsetingimustes...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- meetodid kemikaalide tuvastamiseks histoloogilistes lõikudes. G. m. lahutamatu osa. on tsütokeemilised meetodid, mis tuvastavad kemikaale ettevalmistatud määrde ja väljatrükkide rakkudes ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- meetodid glükoosi kvantitatiivseks ja kvalitatiivseks määramiseks veres ja uriinis, mis põhinevad glükoosi oksüdeerimisel atmosfäärihapnikuga ensüümi glükoosoksüdaasi juuresolekul ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- diagnostilised uurimismeetodid, mis põhinevad antigeenide ja antikehade spetsiifilisel interaktsioonil ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- meetodid sidekoe ja neurogliia kiuliste struktuuride tuvastamiseks histoloogilistes preparaatides, mis põhinevad nende mitmevärvilisel värvimisel...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- 1) pärisnaha histoloogiliste preparaatide värvimise meetod Mayeri gemaluni, kaaliummaarja ja rodamiini lahuse abil; raku tuumad värvuvad siniseks, eleidiin punaseks...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- meditsiinis - meetodite kogum meditsiini ja tervishoiuga seotud objektide ja süsteemide seisundi ja käitumise kvantitatiivseks uurimiseks ja analüüsimiseks ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- viisid erinevate objektide uurimiseks mikroskoobi abil ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- põhineb optikaseaduste kasutamisel, mis on seotud elektromagnetilise kiirguse olemuse, leviku ja vastasmõjuga optilises vahemikus ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- keskkonnaobjektide kvaliteedi uurimise ja hindamise meetodid meeleelundite abil ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- mitmete meetodite üldnimetus histoloogiliste preparaatide hõbedaga immutamiseks gliaal- ja muude argürofiilsete kiudude tuvastamiseks ...
Meditsiiniline entsüklopeedia
- määratakse uurija ja kohtu poolt kuritegude uurimisel ja tsiviilasjade arutamisel tekkivate eriküsimuste lahendamiseks. Neid peetakse ka kohtuekspertiisi ettepanekul...
Meditsiiniline entsüklopeedia

"Viiroloogilised uurimismeetodid" raamatutes

Rage Against The Machine Killing In the Name (1992)

autor Tsaler Igor

Rage Against The Machine Killing In The Name (1992) Los Angelese bändi Rage Against The Machine esimene album ühendas hiphopi ja hard rocki, puistades neile üle päevakajalisi poliitilisi manifeste ja meeldivalt ka arvestatava annuse tihedat funk-rütmi. Esimesele singlile lisatud laulus "Killing in the name"

James Brown Get Up (I Feel Like Being A) Seksimasin (1970)

Raamatust 20. sajandi popmuusika: jazz, bluus, rokk, pop, kantri, folk, elektrooniline, soul autor Tsaler Igor

James Brown Get Up (I Feel Like Being A) Sex Machine (1970) 1960. aastate lõpus hakkas James Brown eksperimenteerima. Südantlõhestav soul filmist The Famous Flames andis koha The J.B.’s särisevale funkile. Saabuva funk-ajastu üks olulisemaid verstaposte oli "Sex Machine", mis kümneminutilises versioonis

Rage Against The Machine

Raamatust Võimatu vastu (kultuuri käsitlevate artiklite kogumik) autor Koltašov Vassili Georgijevitš

Rage Against The Machine Tom Morello: "Meie eesmärk on aidata inimestel vabaneda valede ja vägivalla ahelatest, mis on nad mässinud valitsuste, rahvusvaheliste korporatsioonide, meedia ja erakondadega, et anda inimestele kogu maailmas kindlustunnet homme ja

Tere tulemast masinasse

Raamatust Kellaaeg autor Smirnov Ilja

Tere tulemast masinasse Me võime perestroika alguse oma ajaloos dateerida 1987. aasta jaanuariga. Seejärel toimus keskkomitee liberaalne pleenum ja saime võimaluse avaldada Yunostis nõukogude roki kaasaegsete "staaride" muutmata nimekiri, sealhulgas DDT, CLOUD EDGE ja

Toyoda masinatööstus

Raamatust Gemba kaizen. Kulude vähendamise ja kvaliteedi parandamise tee autor Imai Masaaki

Toyoda Machine Works Toyoda Machine Worksi direktori Yoshio Shima sõnul ilmnesid kvaliteedisüsteemi ja kvaliteedi tagamise standardite loomise eelised 1980. aastatel, kui ettevõte võttis kasutusele kontseptsiooni "kvaliteedil põhinev täielik juhtimine".

Masin

Raamatust Filosoofiline sõnaraamat autor Krahv Sponville André

Masin (masin) "Kui süstikud ise kuduksid," märkis Aristoteles, "ei vajaks käsitöölised töölisi ja peremehed ei vajaks orje" ("Poliitika", I, 4). See on umbes see, mida me nimetame masinaks – liikuma võimeliseks objektiks, millel puudub hing (automaat) ja

Raamatust Internet Intelligence [tegevusjuhend] autor Juštšuk Jevgeni Leonidovitš

Saitide arhiiv Internet Archive Wayback Machine E-posti aadress - http://web.archive.org Igaüks, kes on teda huvitava probleemi kohta piisavalt pika aja jooksul teavet kogunud, teab, kui oluline on mõnikord leida teavet, mis on avaldatud sait mitu aastat tagasi. Mõnikord on see lihtsalt

Interneti-arhiivi tagasitee masin

Raamatust Countering Black PR Internetis autor Kuzin Aleksander Vladimirovitš

Saitide arhiiv Internet Archive Wayback Machine Väga sageli tuleb mustanahaliste PR-inimeste rünnak teile ootamatult. Sel juhul seisate esimest korda silmitsi vajadusega vaenlast tähelepanelikult uurida. Kui te isegi eeldasite sündmuste sellist arengut (näiteks in

4.9. Varundamine Time Machine'iga

autor Skrylina Sofia

4.9. Varundamine Time Machine'iga Mac OS X Leopard võimaldab teil regulaarselt oma arvutist varundada, kasutades Time Machine rakendust. Pärast sobivaid seadistusi käivitub rakendus automaatselt

4.9.2. Looge Time Machineiga oma esimene varukoopia

Raamatust Macintoshi õpetus autor Skrylina Sofia

4.9.2. Looge Time Machine abil esimene varukoopia Enne esimese varukoopia loomise alustamist peate kas sisestama välise draivi või jätma vaba kõvaketta partitsiooni ainult varundamiseks.

4.9.4. Ajamasina kasutamine

Raamatust Macintoshi õpetus autor Skrylina Sofia

4.9.4. Time Machine'i kasutamine Kui olete teinud Time Machine'i vajalikud sätted ja loonud hulga varukoopiaid, võite alustada failide varasemate versioonide otsimist ja taastamist. Selleks: 1. Ava Finderi aken ja vali fail, mida pead taastama.2. Kui

Viroloogiline meetod hõlmab kahte peamist etappi: viiruste eraldamine ja nende tuvastamine. Materjalideks võivad olla veri, muud bioloogilised ja patoloogilised vedelikud, elundite ja kudede biopsiad.

Arboviiruse infektsioonide diagnoosimiseks tehakse sageli viroloogilist vereanalüüsi. Süljes võib tuvastada marutaudi, mumpsi ja herpes simplex viiruseid. Nasofarüngeaalseid tampoone kasutatakse gripi ja teiste ägedate hingamisteede viirusnakkuste, leetrite patogeenide isoleerimiseks. Konjunktiivi pesemisel leitakse adenoviirused. Väljaheitest eraldatakse erinevaid entero-, adeno-, reo- ja rotaviiruseid.

Viiruste isoleerimiseks kasutatakse rakukultuure, kanaembrüoid ja mõnikord ka laboriloomi. Enamikku patogeenseid viiruseid eristab koe- ja tüübispetsiifilisuse olemasolu, "näiteks polioviirus paljuneb ainult primaatide rakkudes, seetõttu kasutatakse konkreetse viiruse eraldamiseks sobivat koekultuuri. Tundmatu patogeeni eraldamiseks on soovitatav samaaegselt nakatavad 3-4 rakukultuuri, eeldades, et üks neist võib olla tundlik.Viiruse olemasolu nakatunud kultuurides määrab spetsiifilise raku degeneratsiooni ehk tsütopatogeense toime areng, intratsellulaarsete inklusioonide tuvastamine, samuti spetsiifilise antigeeni tuvastamine immunofluorestsentsi, positiivsete hemadsorptsiooni- ja hemaglutinatsioonireaktsioonide abil.Linnu embrüod oma halvasti diferentseerunud kudedega sobivad väga paljude viiruste kultiveerimiseks.Kõige sagedamini kasutatavad kanaembrüod.Embrüodes paljunemisel võivad viirused põhjustada nende surma (arboviirused) muutuste ilmnemine koorion-allantoismembraanis (rõugeviirused) või embrüo kehas, kogunenud st hemaglutiniinide (gripiviirused, mumps) ja komplementi siduva viirusantigeeni embrüovedelikes.

Viirused tuvastatakse immunoloogiliste meetoditega: hemaglutinatsiooni inhibeerimine, komplemendi sidumine, neutraliseerimine, geeli sadestamine, immunofluorestsents.

3.4 Bioloogiline meetod

bioloogiline meetod seisneb laboriloomade nakatamises mitmesuguste materjalidega (kliiniline, laboratoorne), et tuvastada patogeen, samuti määrata kindlaks mikroorganismide teatud omadused, mis iseloomustavad nende patogeensust (toksigeensus, toksilisus, virulentsus). Laboratoorsete loomadena kasutatakse valgeid hiiri, valgeid rotte, merisigu, küülikuid jne.

Haiguse paljunemine loomal on absoluutseks tõendiks isoleeritud mikroorganismi patogeensusest (marutaudi, teetanuse jt puhul). Seetõttu on bioloogiline test loomadel väärtuslik ja usaldusväärne diagnostiline meetod, eriti nende infektsioonide puhul, mille patogeene leidub inimorganismi uuritavas bioloogilises söötmes madalas kontsentratsioonis ja kasvavad tehissöötmel halvasti või aeglaselt.

3.5 Immunoloogiline meetod

Immunoloogiline meetod(seroloogiline) hõlmab vereseerumi, aga ka teiste bioloogiliste substraatide uuringuid spetsiifiliste antikehade ja antigeenide tuvastamiseks. Klassikaline serodiagnoos põhineb tuvastatud või kahtlustatava patogeeni vastaste antikehade määramisel. Reaktsiooni positiivne tulemus näitab patogeeni antigeenide vastaste antikehade olemasolu uuritavas vereseerumis, negatiivne tulemus näitab nende puudumist. Mitmete nakkushaiguste tekitaja antikehade tuvastamisest uuritavas vereseerumis ei piisa diagnoosi tegemiseks, kuna see võib kajastada nakkus- või vaktsineerimisjärgse immuunsuse olemasolu, seega "paaritud" verd. uuritakse seerumeid, esimene võetakse haiguse esimestel päevadel ja teine võetakse 7-10-päevase intervalliga. Sel juhul hinnatakse antikehade taseme tõusu dünaamikat.

Diagnostiliselt oluline antikeha tiitri tõus uuritud vereseerumis on algtasemega võrreldes vähemalt 4 korda suurem. Seda nähtust nimetatakse serokonversiooniks. Haruldaste nakkushaiguste, aga ka viirushepatiidi, HIV-nakkuse ja mõne muu puhul näitab antikehade olemasolu patsiendi nakatumist ja on diagnostilise väärtusega.

Lisaks antikehade tiitri määramisele võivad seroloogilised uuringud määrata antikehade isotüübi. On teada, et inimese keha esmakordsel kohtumisel patogeeniga haiguse ägedal perioodil tuvastatakse IgM-i kuuluvate antikehade kiirem suurenemine, mille tase, saavutades maksimumväärtuse, seejärel langeb. Haiguse hilisemates staadiumides suureneb IgG antikehade hulk, mis püsivad kauem ja määratakse taastumisperioodil. Taaskohtumisel patogeeniga ilmnevad immunoloogilise mälu tõttu humoraalsed immuunsusreaktsioonid IgG antikehade kiiremas tootmises ning M-klassi antikehi toodetakse väikestes kogustes. IgM antikehade tuvastamine viitab käimasoleva nakkusprotsessi olemasolule ja IgG antikehade olemasolu viitab varasemale infektsioonile või vaktsineerimisjärgsele immuunsusele.

Arvestades primaarse ja sekundaarse immuunvastuse omadusi, võimaldab IgM- ja IgG-antikehade suhte analüüs mõnel juhul eristada nakkusprotsessi staadiumi (haiguse kõrgus, taastumine, retsidiiv). Näiteks viirusliku hepatiidi A (HA) puhul on usaldusväärseks diagnostikameetodiks HAV-vastaste IgM antikehade määramine vereseerumis. Nende tuvastamine viitab praegusele või hiljutisele HAV-infektsioonile.

Seroloogiline uuring nakkushaiguste antikehade tuvastamiseks on laboratoorseks diagnoosimiseks kättesaadavam meetod kui patogeeni eraldamine. Mõnikord on positiivne seroloogiline reaktsioon ainus tõend organismi kohtumisest ja koostoimest vastava nakkushaiguse tekitajaga. Lisaks saab mitmeid sarnase kliinilise pildiga haigusi (näiteks riketsioosi, enteroviiruse infektsioonid) eristada ainult seroloogiliselt, mis peegeldab seroloogiliste meetodite tähtsust nakkushaiguste diagnoosimisel.