Laialt levinud stafülokoki infektsioonid, alates ülemiste hingamisteede haigustest, võivad mõjutada kogu keha. Teatud organite valdava kahjustuse tõttu võivad stafülokoki infektsioonide uurimisel materjaliks olla röga, mäda, veri, loputavad ninaneelu tampoonid, kuseteede voolus, toiduained (peamiselt piima- ja kondiitritooted), nakatunud pindadelt võetud tampoonid, okse, eksudaadid. valitud rangelt järgides aspektide reegleid.

Materjali analüüsimisel kasutatakse mikroskoopilisi, bakterioloogilisi (mikroobide puhaskultuuri eraldamine ja nende tuvastamine) ja bioloogilisi meetodeid.

I. MIKROSKOOPILINE MEETOD

Mikroskoopiline meetod on iseseisva tähtsusega ainult aseptilise töö puhul materjalidega, mis on tervel inimesel steriilsed (näiteks veri, tserebrospinaalvedelik). Stafülokokkide tuvastamisel on sel juhul sõltumatu diagnostiline väärtus. Muudel juhtudel kasutatakse mikroskoopilist meetodit esialgse, indikatiivsena. Selle kasutamisel tuleb pöörata tähelepanu mikroorganismide arvule igas vaateväljas (stafülokokihaiguste korral võib patogeenne patogeen ülejäänud mikrofloora välja tõrjuda ja seda leidub määrdudes tohututes kogustes), klastrid (kõrge patogeensusega stafülokokk jaguneb intensiivselt, isenditel pole aega hajuda ja moodustada suuri kobaraid), üksikute isendite suurus (patogeensed stafülokokid on enamasti väga väikesed).

II. BAKTERIOLOOGILINE MEETOD

Bakterioloogiline meetod on patogeenide puhaskultuuri eraldamine ja nende tuvastamine.

Stafülokokid on üks levinumaid mikroorganisme. Neid leidub ka tervetel inimestel. Seetõttu on haiguse diagnoosimiseks, selle stafülokoki olemuse kindlakstegemiseks väga oluline tõestada isoleeritud bakterite patogeensust. Diagnostikaprobleemi lahendamine on tihedalt seotud selle nakkuse epidemioloogia, ravi ja ennetamise küsimuste selgitamisega. Selle põhjal koosneb bakterioloogiline meetod mitmest etapist ja suunast.

1. Haiguse diagnoosimine seisneb stafülokoki puhaskultuuri eraldamises ja selle virulentsuse tuvastamises.
2. Nakkusallikate tuvastamine ja võimalikud levikuviisid – erinevatest, kuid omavahel seotud allikatest eraldatud stafülokokkide faagitüüpimine.
3. Kõige tõhusama ravimeetodi valik on kultuuride tundlikkuse määramine antibiootikumide ja terapeutiliste bakteriofaagide, eriti polüvalentse püofaagi, monovalentse stafülofaagi suhtes.

Kõik ülaltoodud uuringu etapid kajastuvad skeemis:

Patogeeni puhaskultuuri eraldamisel tuleks arvesse võtta selle kultuurilisi halofiilsuse tunnuseid (hea areng lauasoola liigse sisalduse juuresolekul, samal ajal pärssides muud mikrofloorat), suurt valkude ja süsivesikute vajadust. See saavutatakse valikuliste toitainete söötmete kasutamisega, mis täidavad samaaegselt diferentsiaaldiagnostika funktsioone.

STAFÜLOKOKI TOITINESÖÖTTE KOOSTIS

• 7,5% soolalahus MPA pH 7,2-7,4: lihavesi - 100 ml, peptoon - 10 g, naatriumkloriid - 75 g, agar-agar - 20,0. Söödet steriliseeritakse temperatuuril +100 °C -30 minutit.
• PIIMA-SOOLA MPA valmistatakse 7,5% soola MPA-st, kuid sulatatud ja 45 °C-ni jahutatud söötmele lisatakse 10-20% steriilset lõssi. Pärast seda tehakse 3 päeva järjest 30 minuti jooksul fraktsionaalne steriliseerimine.
• VERE MPA valmistatakse tavalisest MPA-st, lisades sellele 5% defibrineeritud küüliku- või lambaverd. Inimvere kasutamine on sobimatu.

Analüüsi tegemisel tuleb arvestada järgmiste stafülokokkide tüüpilistest tunnustest kõrvalekaldumise võimalustega.

1. Stafülokokkide tavaline grampositiivsus võib kaduda nende varieeruvuse protsessis: ravimiresistentsuse ilmnemisel ultraviolettkiirgusega kokkupuutel lüsosüümiga. Seda tuleks meeles pidada verest määrde tegemisel ja vere MPA-st külvide tegemisel.
2. Viimaste aastate pigmentatsioon ei ole antibiootikumide laialdase kasutamise ja nende varieeruvuse tõttu lakanud olemast stabiilne stafülokokkide tunnus. Pigment võib ümberkülvi ajal muutuda. Kuldne pigment ei lange alati kokku patogeeni patogeensusega ning valgete ja muude pigmentide olemasolu ei välista selle stafülokoki osalemist haiguse etioloogias.

VIRULENTSUSE PEAMISTE NÄITAJATE MÄÄRAMINE

Stafülokokkide virulentsuse peamised näitajad on hemolüütiline aktiivsus, ensüümi plasmakoagulaasi tootmine ja nekrotoksilisus.

Kultuuride patogeensuse astme hindamisel kasutatakse laialdaselt Grossi teste, mille järgi võib kõik stafülokokid jagada kolme rühma. Tingimusteta patogeensete stafülokokkide esimesse rühma kuuluvad bakterid, millel on (äge hemolüütiline aktiivsus, koaguleeriv tsitraadiplasma 1-2 tundi ja millel on väljendunud nekrotiseerivad omadused. Teise rühma oportunistlikud või mõõdukalt patogeensed stafülokokid on templid, mis annavad agaril kerge hemolüüsi 5% küüliku- või lambaverest, mis koaguleerib plasma 6 tunni pärast ja küülikule intradermaalselt manustatuna põhjustab punetust ja infiltratsiooni.Kolmandasse mittepatogeensete stafülokokkide rühma kuuluvad kultuurid, mis ei hemolüüsi erütrotsüüte, ei koaguleeri plasmat ega oma nekrotiseerivad omadused.

Seega põhineb isoleeritud stafülokoki virulentsuse hindamine kolme patogeense toime näitaja põhjalikul testil.

Samas on ametlikke viiteid sellele, et stafülokokkide eraldamisel piimhappetoodetest, eriti pikaajaliselt külmkapis hoitud toodetest, võivad üksikud patogeensusnähud kaduda, säilitades samal ajal toksiinide moodustumise võime tervikuna. Seetõttu tuleks patogeenseks pidada stafülokokke, millel puudub üks patogeensuse tunnustest (Erismani Instituudi 1967. aasta õpetuskiri).

HEMOTOKSIINI MÄÄRAMINE viiakse läbi kultuuri otsese inokuleerimisega vere MPA-le, mis sisaldab 5-10% defibrineeritud küüliku või lamba verd. Inimvere lisamine on ebasoovitav, kuna alfa-hemolüsiini sekreteerivad stafülokokid ei hävita inimese erütrotsüüte ja seetõttu on selle haigest inimesest eraldatud tüve patogeensuse kohta tehtud otsus ebausaldusväärne.

Mõnikord on stafülokokkide varieeruvuse tõttu, samuti kultuuride pikaajalisel säilitamisel ebasoodsates tingimustes viimaste hemolüütiline aktiivsus nõrgenenud või kaob täielikult. Bakterite hemolüütilise võime taastamiseks on soovitatav lisada hemotoksilisuse testitavale söötmele redutseerivat segu kiirusega 0,015 g iga 10 ml söötme kohta. Segu koosneb ühest osast Na 2 SO 3 (naatriumsulfaat) ja kahest osast Na HSO 3 (naatriumvesiniksulfaat). Lahustatavat segu hoitakse pimedas ja lisatakse ex tempore sulakeskkonnale. Eksotoksiini hemolüütilisuse säilitamiseks stafülokoki kultuuris on soovitatav lisada ka 100 ml küllastunud Na 2 S 2 0 3 lahust (redutseerija) ja 250 ml hüdrokinooni küllastunud lahust (stabilisaator). 100 ml kultuuri filtraati. VI Ioffe teeb ettepaneku hemolüütilise aktiivsuse taastamiseks lisada iga 0,4 ml kohta ainult 0,1 ml 1% naatriumsulfaadi Na 2 SO 3 lahust.

PLASMOKOAGULAASI MÄÄRAMINE viiakse läbi stafülokoki kultuuri külvamisega kitsasse katseklaasi 0,5 ml 5% küüliku või inimese tsitraadi plasmaga. Põllukultuurid asetatakse 6-10 tunniks termostaadi, mille tulemused registreeritakse 1, 2, 3 ja 6 tunni pärast. Inimese vereplasma annab ebajärjekindlaid tulemusi ning glükoosi ja mertiolaadiga doonoriplasma ei sobi üldse. Kui inimese plasmat ei ole võimalik asendada, kasutatakse seda alles pärast 10-kordset lahjendamist soolalahusega.

Koos klassikalise plasma koagulaasi määramise meetodiga kasutatakse ka plasma koagulatsiooni reaktsiooni klaasil või kiirendatud "slaiditesti". See metoodiline tehnika põhineb koagulaasaktiivsete stafülokokkide võimel kleepuda kokku vereplasmaga ja seda koaguleerida. Koagulaasnegatiivsetel tüvedel see omadus puudub. Reaktsiooni läbiviimiseks võetakse tilk vett, selles suspendeeritakse katsekultuur, misjärel lisatakse üks tilk lahjendatud küüliku või inimese vereplasmat. 15-60 sekundi pärast moodustub plasma tromb. Hilisemat (minuti pärast) reaktsiooni peetakse kahtlaseks ja reaktsiooni, mis toimub 3 minuti pärast, loetakse negatiivseks.

NEKROTOKSIINI MÄÄRAMINE viiakse läbi 0,2 ml 2 miljardi Staphylococcus aureuse päevase agarkultuuri füsioloogilises lahuses oleva suspensiooni nahasisese süstimisega küülikule. Loomi jälgitakse 24-48 tundi. Positiivse reaktsioonina käsitletakse ainult kollaka keskosa, tumeda serva ja erepunase äärega infiltraati piki perifeeriat, millele järgneb nekroos.

STAFÜLOKOKKI PATOGEENSUSE TÄIENDAVATE NÄITAJATE MÄÄRAMINE

HÜALURONIDAASI ENSÜÜMI MÄÄRAMINE viiakse läbi kultuuri testimisega hüaluroonhapet sisaldaval substraadil. Viimasena kasutatakse väljavõtet vastsündinu nabanööridest. Selleks pestakse 0,5% karboolhappe lahusesse kogutud nabanöörid koguses 3-5 tükki, pestakse verest põhjalikult destilleeritud veega, puhastatakse veresoontest, tükeldatakse peeneks ja lastakse kaks korda läbi hakklihamasina. . Seejärel hakkliha kaalutakse ja valatakse pooleteise mahu destilleeritud veega, seejärel jäetakse see 30 minutiks toatemperatuurile, aeg-ajalt loksutades. Seejärel valatakse kogu see mass 2-3 kihi steriilse marliga lehtrisse, filtreeritakse, pressitakse, visatakse minutiks keevasse vette, mis vastab kvantitatiivselt purustatud nööride algkaalule. Lase keema. Vedelik filtreeritakse kiiresti läbi kahekordse steriilse marli kihi steriilsetesse katseklaasidesse ja igasse neist lisatakse substraadi säilitamiseks paar tilka kloroformi. Seejärel suletakse katseklaasid vatitikuga ja asetatakse säilitamiseks külma. Ekstrakt püsib nendes tingimustes peaaegu muutumatuna mitu kuud.

Hüaluronidaasi test viiakse läbi kahes etapis. Esimene neist on hüaluroonhappe tööannuse määramine (katse tehakse ainult üks kord pärast ekstrakti valmistamist ja korratakse 1-2 korda kuus pikaajaliseks säilitamiseks), teine ​​on hüaluronidaasi tuvastamine. ensüüm.

Hüaluroonhappe tööannuse ja tiitri määramise skeem
Reaktiivid	Tuubid ja nende sisu ml-des
	1	2	3	4	5	6
Hüaluroonhappe ekstrakt	0,1	0,2	0,3	0,4	0,5	0,6
Dietüül. vesi või füüsiline lahendus	0,9	0,8	0,7	0,6	0,5	0,4
Termostaadis +37 °C juures 15 min.
15% äädika lahus. happed (indikaator)	2 k	2 k	2 k	2 k	2 k	2 k
Tulemus (hüübe moodustumine	-	+	+	+ +	+ + +	+ + + +

Katseklaasid asetatakse 15 minutiks 37 °C termostaadi, misjärel lisatakse 2-3 tilka 15% äädikhappe lahust, loksutatakse õrnalt ja tulemused loetakse trombi moodustumise järgi. Hüaluroonhappe tiitriks peetakse selle minimaalset kogust, mis äädikhappe toimel annab selge trombi. Selles näites on hüaluroonhappe substraadi tiiter 0,2 ml. Tööannusena võetakse sama kogus.

Kultuuride hüaluronidaasi aktiivsuse määramise skeemid, vt allpool.

Katseklaaside kogu sisu segatakse, asetatakse esmalt 15 minutiks termostaadi, seejärel 5 minutiks külma ja lisatakse 2-3 tilka 15% äädikhapet. Hüaluronidaasi olemasolu bakterites registreeritakse trombi puudumisega uuritavas proovis. Kontrolltorusse peaks tekkima korralik tromb, kuna siin on terve hüaluroonhape.

Katsekultuuri hüaluronidaasi aktiivsuse täpsemaks kvantitatiivseks määramiseks paigutatakse proov vastavalt järgmisele üksikasjalikule skeemile.

Kultuuride hüaluronidaasi aktiivsuse määramise skeem
Komponendid	katseklaasid
	1	2
	(peamine näidis)	hüaluronidaasi happe kontroll
Hüaluroonhappe ekstrakt tööannuses (ml)	0,2 ml	0,2 ml
Filtraat – ensüüm või 2 miljardit mikroobide suspensiooni soolalahuses (ml.)	0,3 ml	-
Destill. vesi või füüsiline lahus (ml)	0,2	0,5 ml
Termostaadis +37 °C juures 15-30 minutit, seejärel 5 minutit külmas, et ensüümi toime peatada
15% äädikhappe lahus	2 tilka	2 tilka

Hüaluronidaasi aktiivsuse kvantitatiivse määramise skeem
Komponendid ml-des	katseklaasid
	1	2	3	4	5	6
						hüaluroonhappe kontroll
Hüaluroonhappe ekstrakt orjas. annus (ml)	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2
Bakterite suspensioon 2 miljardit (ml)	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1	-
Destill. vesi või füüsiline lahus ml-des	0,2	0,3	0,4	0,5	0,6	0,7
Hoida termostaadis, lisada külmas indikaator 15% äädikhapet
Tulemus (hüübe moodustumine)	-	-	-	+	+	+

Kultuuri hüaluronidaasi aktiivsuse tiiter selles näites on 0,3 ml.

Fibrinokinaasi määratlus põhineb stafülokoki võimel lüüsida värske vere fibriini hüübimist. Testimiseks võtke 0,5 ml stafülokokkide päevast puljongikultuuri, lisage 0,2 ml värskele inimese plasmale või verele 0,8 ml soolalahusega. Seejärel segage ettevaatlikult pärast 0,5 ml 0,25% kaltsiumkloriidi lahuse lisamist. Selle reaktsiooni kontrolliks on katseklaas, millel on kõik samad komponendid, kuid ilma bakteriteta. Torud asetatakse 37 °C termostaadi. Esimese 15 minuti jooksul tekib hüübimine. Sellest hetkest alates jälgitakse moodustunud trombi lahustumise kulgu. Tavaliselt tagavad patogeensed kultuurid täieliku fibrinolüüsi 24 tunni jooksul.

CHAPMANNI KESKKONNA KULTUURIDE ERINEVUS. Söötme valmistamine: 1 liitrile 3,5% MPA-le lisatakse 3,3 ml emajuurvioleti või kristallvioleti 0,1% vesilahust. Valmistatud sööde valatakse tassidesse. Pärast kõvenemist on hallikas-lilla värvus. Patogeensed stafülokokid annavad sellele lillad või oranžid kolooniad, mittepatogeensed - valged või lillad.

PATOGEENSE STAFÜLOKOKKUSE DIFERENTSEMINE mannitooli suhtes viiakse läbi Giosa vedelal söötmel, mis sisaldab 0,5% mitmehüdroksüülset alkoholi - mannitooli. Patogeensed stafülokokid mannitool hävivad 36 tunni pärast, mittepatogeensed palju hiljem. See sümptom on väga ebastabiilne ega ole iseseisev patogeensuse näitaja.

KIIRENDATUD BAKTERIOLOOGILINE ISOLATSIOONI MEETOD
JA PATOGEENSE STAFÜLOKOKKI IDENTIFITSEERIMINE PETER DANILI JÄRGI

Meetod põhineb tavapärase vere MPA komplekssel kasutamisel lamba erütrotsüütidega ning mannitooli, naatriumkloriidi ja kaaliumtelluriidiga söötmega, mille retsepti töötas välja Petru Danila.

KOLMAPÄEV PETRO DANIL ON JÄRGMISE KOOSTIS: destilleeritud vesi-100 ml; peptoon - 0,5 g; naatriumkloriid - 10 g; mannitool või laktoos - 0,5 g; kaaliumtelluriit - 0,5 g; bromtimoblau - 0,004 g.

Söötme valmistamine: peptoon, sool lahustada soojas vees, lisada 2 ml bromtümolbau lahust (0,1 g 3,2 ml N/20 naatriumhüdroksiidi lahuse ja 50 ml destilleeritud vee kohta), steriliseerida +120 °C juures 15 minutit. Pärast jahutamist lisage 5 ml keetmisega steriliseeritud 10% mannitooli või laktoosi vesilahust ja 5 ml autoklaavis steriliseeritud naatriumtelluriidi 1% vesilahust. Sööde on tumeroheline, pH -7,6. Kui värvus on sinine, lisatakse sellele paar tilka 10% vesinikkloriidhapet. Sööde valatakse 1-2 ml katseklaasidesse.

Petru Danili söötme kollasus 24 tundi pärast nakatamist ja hemolüüs stafülokoki kolooniate ümber viitavad patogeensete bakterite eraldamisele.

PATOGEENSE STAFÜLOKOKI KIIRENDATUD KÕIGE KÕIGE IDENTIFITSEERIMINE Pjotr ​​Danili järgi

Patogeensete stafülokokkide diferentseerimine viiakse läbi ühes katseklaasis. Meetod põhineb patogeensete stafülokokkide võimel aglutineerida inimese plasma juuresolekul, koaguleerida seda ja põhjustada ka homoloogsete erütrotsüütide aglutinatsiooni. Testi läbiviimiseks lisatakse 1 ml nitraat-inimese plasmale 10 ml füsioloogilist soolalahust ja 0,05 ml plasma alla settinud erütrotsüütide massi. Katseklaasi loksutatakse ja 0,5 ml segu valatakse teise katsutisse. Siia lisatakse võimalikult palju stafülokoki kultuuri, mis hõõrutakse ettevaatlikult katseklaasi seinale vedela substraadi lähedale, puudutades kergelt selle pinda. Hõõrumist jätkatakse kuni homogeense suspensiooni saamiseni. Patogeenne stafülokokk aglutineerub plasmaga ja homogeniseerumist ei toimu, mittepatogeenne - moodustab ühtlase homogeense massi.

Patogeensed stafülokokid moodustavad kultuuri plasmasubstraadis hõõrudes granuleeritud ebahomogeense suspensiooni ning pärast termostaadis inkubeerimist põhjustavad erütrotsüütide hemaglutinatsiooni ja plasma koagulatsiooni. Sel juhul moodustavad mittepatogeensed templid ühtlase häguse suspensiooni ning plasma koagulatsiooni ja erütrotsüütide aglutinatsiooni ei toimu.

Tab. 1. Faagitüübid
Grupp	bakteriofaagid
ma	29, 52, 52A, 79, 80
II	3A, 3B, 36, 55, 71
III	6, 7, 42E, 47, 53, 54, 75, 77, 83A
IV	42D
V	81 ja 187

STAFÜLOKOKI FAGOTÜÜPIMINE

Erinevates paikkondades ringlevad erinevat tüüpi stafülokokid. Seetõttu on nende määramisel stafülokoki kultuurides suur tähtsus võimaliku nakkusallika ja selle levikuteede selgitamisel.

Rahvusvahelise faagi tüpiseerimise komitee nomenklatuuri järgi eristatakse plasma hüübivate stafülokokkide hulgas 22 tüüpi faage (tabel 1):

Stafülokokkide lüüsitavuse määramine nende bakteriofaagide poolt viiakse läbi järgmiselt.

KULTUURIDE ETTEVALMISTAMINE FAGOTÜÜPIMISEKS

1. Kultuuride plasma koagulatsioonivõime määramine (bakteriofaagid viitavad ainult koagulaas-positiivsetele tüvedele).
2. Kultuuri ettevalmistamine: noser BCH-s pH-ga -7, 2-7, 4, kasvab +37 °C juures 18-24 tundi.
3. Järgmisel päeval - uuesti külvamine sama pH-ga värskesse BCH-sse, kultuuri kasvatamine termostaadis 3 tundi.

FAGOTÜÜPIMINE

1. Kuivatage topsid värskelt valmistatud 1,25% MPA-ga termostaadis 1-1,5 tundi.
2. Jagage tassi põhi pliiatsiga klaasil 23-24 ruuduks, millest igaühes märgitakse testitavate bakteriofaagide tüübid.
3. Inokuleerige nõusse 0,2 ml isoleeritud staphylococcus aureuse 3–4-tunnist kultuuri ja jaotage see spaatliga ühtlaselt üle söötme pinna.
4. Kuivatage saaki termostaadis +37 ° C juures 30-45 minutit.
5. Tilgutage igasse ruutu, millel on silmus, tilk vastavat bakteriofaagi kümnekordses lahjenduses (1:10), mis on valmistatud Hottingeri puljongis.
6. Kuivatage tilk faagi, asetage topsid tagurpidi termostaadi 18-20 tunniks.
7. Tulemuste arvestamine ja stafülokoki faagi tüübi määramine toimub steriilse koha olemasolul kultuuri lüüsimise kohas.

Tulemus loetakse positiivseks, kui lüüsi aste on määratud vähemalt 2 plussiga. Sel juhul moodustab lüüsitsoon umbes 50% bakteriofaagi manustamiskoha pindalast.

Paljudel juhtudel lüüsitakse stafülokokkide kultuure mitte ühe, vaid mitme faagi poolt, moodustades omamoodi steriilsete laikude fagomosaiigi. Stafülokokid, millel on sama mosaiik või erinevad 1 faagi võrra, loetakse identseteks.

BIOLOOGILINE MEETOD

Bioloogilise diagnostika meetodit kasutatakse vaid juhul, kui kahtlustatakse enterotoksiini tootvate enterotroopsete stafülokokkide põhjustatud toidumürgitust. Selle põhimõte taandub staphylococcus aureus'ega nakatumise kahtlusega toidujääkide söötmisele, isoleeritud kultuurile ja pesuveele. Parim bioloogiline mudel on sel juhul 1,5-2-kuused kassipojad (kultuuriuuringute jaoks) ja täiskasvanud kassid (enterotoksiini tuvastamisel). Stafülokoki tilgutiga nakatumise korral seda meetodit ei kasutata.

1. Nakkushaiguste diagnoosimise juhised, toim. prof. K. I. Matvejeva ja M. I. Sokolov. 1964, lk 549-553, 489-492.
2. Predtechensky B. E. Kliiniliste laboratoorsete uuringute käsiraamat, lk 719-774, 776-786, 890-896.
3. Djatšenko S. S. Nakkushaiguste diagnoosimise mikrobioloogilised meetodid, lk 307-313.
4. Juhend aga mikrobioloogia, nakkushaiguste kliinik ja epidemioloogia, t. VI, jaotis. VI, lk 475–487.
5. Mõnede nakkushaiguste bakterioloogiliste uuringute skeemide kogumine. Metoodiline käsiraamat osakoormusega üliõpilaste doktoritele-kadettidele, toim. prof. P. N. Kashkina, 1965, lk 4
6. Mikrobioloogiliste ja viroloogiliste uurimismeetodite käsiraamat, toim. M. O. Birger, 1967, lk 7-16, 250-254.
7. Vygodchikov GV Stafülokoki infektsioonid. Medgiz. 1963. aasta.

Allikas: Motavkina N.S., Pyanova R.E. Mõnede tilkinfektsioonide ja toksoplasmoosi mikrobioloogiline diagnoos. Metoodiline arendus õpilastele. VSMU, 1973

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus- fakultatiivsed anaeroobsed grampositiivsed kokid, mitteliikuvad, katalaas- ja koagulaaspositiivsed. Mõned tüved S. aureus toodavad stafülokoki enterotoksiine (SE), mis põhjustavad toidumürgitust. Stafülokokid esinevad õhus, tolmus, heitvees, vees, piimas, toidus, aga ka toidutootmise seadmetel, erinevatel pindadel keskkonnas, inimeste ja loomade nahal. Inimesed ja loomad on peamised nakkusallikad. Stafülokokid esinevad ninas ja kurgus, samuti juustel ja nahal vähemalt 50% tervetest inimestest. Staphylococcus aureus võimeline kasvama laias temperatuurivahemikus 7-48,5°C (optimaalne 30-37°C); pH 4,2 - 9,3 (optimaalne pH 7,0-7,5) ja kõrge naatriumkloriidi kontsentratsiooniga (kuni 15% NaCl). Need omadused võimaldavad bakteritel asustada mitmesuguseid toiduaineid. Stafülokokk-toidumürgitusega kõige sagedamini seotud toidud on liha ja lihatooted, linnuliha, munad, salatid (sisaldavad mune, tuunikala, kana, kartulit, pastat), maiustused (nt koorepirukad, šokolaadiekleerid), võileivatäidised, piim ja piimatooted . Seega võivad toidud, mida küpsetamise ajal käsitsi töödeldakse ja seejärel soojas hoitakse, olla tõeliseks stafülokoki toidumürgituse allikaks.

Mürgistus stafülokoki infektsiooniga

Haiguse põhjus on toodetud Staphylococcus aureus toksiine, mistõttu haigust iseloomustab väga lühike peiteaeg – tavaliselt 0,5–6 tundi. Patsiendi vastuvõtlikkus toksiinidele määratakse patsiendi seisundi, toksiini kontsentratsiooni ja söödud saastunud toote koguse järgi. Nakkuslik annus võib olla alla 1,0 µg, mis vastab ligikaudu 100 000 cfu/g toote kohta. Haiguse kõige levinumad sümptomid on iiveldus, oksendamine, toidu vastumeelsus, kõhukrambid ja kõhulahtisus. Rehabilitatsiooniperiood kestab tavaliselt 1-3 päeva, kuid rasketel juhtudel võib täielik taastumine võtta kauem aega. Teistele haigust ei edastata, patsiendid peavad võtma suures koguses vedelikku.

Patogeensus, haiguse ulatus

Koaguloospositiivsed stafülokokid on grampositiivsed katalaaspositiivsed mikroorganismid, mis moodustavad tüüpilisi kolooniaid selektiivsel diagnostilisel toitainekeskkonnal, mis on koagulaaspositiivne (S. aureus; S. aureus spp. anaerobius) või küüliku plasmaspetsiifiline reaktsioon küüliku plasma fibrinogeeniagaril. määratud standardmeetodil. Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) on koaguloospositiivsed stafülokokid, mis moodustuvad atsetoiin ja maltoosi kääritamine aeroobsetes tingimustes nende biokeemiliste testide standardmeetodil määramise ajal.

Hiljutiste arenenud riikides läbiviidud uuringute kohaselt viib kõigist teadaolevatest infektsioonidest kõige sagedamini surma üks kuulsamaid "tavalisi" baktereid Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), kõiki koagulaasi tootvaid stafülokoki tüvesid nimetatakse nn. kuldne). See tinglikult patogeenne mikroorganism on isoleeritud 15–30% tervetest inimestest ja enamikus neist on kandmine piiratud mitme kuuga. Immuunsuse puudulikkusega patsiendil on patogeen paljude eluohtlike zooantroponootiliste infektsioonide põhjuseks. Kõige tavalisem toksiline stafülokokkhaigus on toidumürgitus. Paljud Staphylococcus aureus'e tüved toodavad enterotoksiin. See mürk põhjustab kõhulahtisust, oksendamist, valu ja kõhukrampe. Uus-Meremaal tehtud uuringu kohaselt sureb 8,6% Staphylococcus aureus sepsisega haiglasse sattunud lastest. Paljude riikide dermatovenereoloogid on mures stafülokoki infektsioonide ja stafülokokist põhjustatud surmajuhtumite arvu suurenemise pärast. Bakterid põhjustavad toidu riknemist, sealhulgas nn mitteriknevat toitu. Aretades näiteks kõvas juustust ja salaamit, eraldavad bakterid toksiine. Need on tõsise toidumürgituse kõige levinumad põhjused. Küpsetamise ajal stafülokokk sureb, kuid selle termostabiilsed toksiinid ei hävi. Stafülokokid on paljude inimeste haiguste, sealhulgas südame (endokardiit ja perikardiit), luu- ja lihaskonna (osteomüeliit ja nakkuslik artriit) põhjus. Nahal ja pehmetes kudedes põhjustab stafülokokk nn ketendava naha sündroom ja tselluliit, mis on kõige levinumad nakkuslikud nahahaigused. WHO andmetel on Staphylococcus aureus tervishoiuasutustes kõige sagedamini nakatunud bakterite nimekirjas. Intravenoossete kateetrite ja muude meditsiiniseadmete kasutamisel, mis puutuvad kokku keha sisekeskkonnaga, on suur stafülokokiga nakatumise oht. Riskifaktoriks on ka kunstlik ventilatsioon. Stafülokoki infektsioon võib tekkida ka siis, kui haiglates rikutakse tavalisi hügieenitavasid. Kokku moodustab S. aureus umbes 30% kõigist "haiglainfektsioonidest". Pideva desinfektsioonivahendite ja antibiootikumide kasutamise tingimustes ellujäävad stafülokokid on personali kõige tõsisem riskitegur, haiglanakkuse aluseks.

Taksonoomia

Stafülokokid on sfääriliste, liikumatute, asporogeensete, grampositiivsete, kemoorganotroofsete, fakultatiivsete anaeroobsete või aeroobsete bakterite perekond Micrococcaceae perekonnast. Perekonda Staphylococcus kuulub umbes 30 liiki, millest 14 leidub inimese nahal ja limaskestadel, sh. S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus. Liikide tuvastamiseks kasutatakse peamiselt 3 testi: plasmakoagulaasi tootmine, mannitooli ja glükoosi anaeroobne fermentatsioon. Bakteri antigeenne struktuur on keeruline, teikiinhapped on liigispetsiifilised antigeenid.

Bakterite ja kolooniate morfoloogia

Bakterirakud läbimõõduga 0,5-1,5 mikronit jagunevad asümmeetriliselt mitmel tasapinnal, moodustades viinamarjakobaraid meenutavaid kobaraid. Seal on üksikud rakud, paarid ja tetrad. Rakusein sisaldab peptidoglükaani ja glütseritiinhapet. Stafülokokid moodustavad siledaid kolooniaid, mis on värvitud karotenoididega kollaseks või oranžiks. Kuid pigmentatsioon ei ole spetsiifiline tunnus. Koloonia-agaril kasvatamisel moodustuvad hägused, ümarad, ühtlased kreemika, kollase või oranži värvi kolooniad. Vedelas söötmes kasvatamisel põhjustavad bakterid nende ühtlase hägususe ja seejärel lahtise sademe moodustumise, mis muutub viskoosseks massiks.

Füsioloogilised ja biokeemilised omadused

Stafülokokid on fakultatiivsed anaeroobid, kuid kasvavad hapniku juuresolekul kiiresti ja rikkalikult. Oksüdatiivse ja ensümaatilise metabolismiga kemoorganotroofid. Biokemikaalid on väga aktiivsed. Nad toodavad katalaasi, glükoosiga söötmel anaeroobsetes tingimustes, enamik tüvesid moodustavad atsetoiini (positiivne Voges-Proskaueri reaktsioon). Nad eraldavad argeniinipuljongil kasvamise käigus ammoniaaki, redutseerivad nitraadid nitrititeks või molekulaarseks lämmastikuks, hüdrolüüsivad aktiivselt valke ja lagundavad aeroobsetes tingimustes palju süsivesikuid äädikhappeks ja süsinikdioksiidiks. Üldine tunnus on glükoosi kääritamine anaeroobsetes tingimustes, mis eristab stafülokokke mikrokokkidest. Bakterid kasvavad aluselises söötmes temperatuuril 37°C (optimaalne 35-40°C), kuid võivad kasvada ka laiemas temperatuurivahemikus (6,5÷46°C). Kasvuoptimum märgiti pH 7,0-7,5 juures, kuid kasv on võimalik vahemikus pH=4,2÷9,3. Nad taluvad hästi kõrget osmootset rõhku, seetõttu on nende jaoks valikuliseks substraadiks kõrge naatriumkloriidi kontsentratsiooniga söötmed - munakollane või piimasoola agar. Stafülokokid taluvad hästi kuivamist, säilitades samas virulentsuse; sureb otsese päikesevalguse käes 10-12 tundi. Päris kuumuskindel: 70-80 o C juures surevad 20-30 minutiga, 150 o C juures - 10 minutiga; kuiv kuumus tapab nad 2 tunniga. Bakterid on vastupidavad madalatele temperatuuridele, korduv külmutamine ja sulatamine ei tapa neid. Stafülokokid on vähem vastupidavad desinfektsioonivahendite (vesinikperoksiid jne) toimele, kuid vastupidavad puhta etanooli toimele. Aeroobsetes tingimustes kasvatamisel vajavad bakterid aminohappeid ja vitamiine, anaeroobsed tingimused aga täiendavat uratsiili ja täiendavaid süsinikuallikaid. Vereagaril võib tekkida mitu liiki. hemolüsiinid- ained, mis mõjutavad erütrotsüüte, leukotsüüte ja teisi rakke. Nad toodavad ka fibrinolüsiini, fosfataasi, bakteriotsiine; mõned tüved toodavad koagulaasi, DNaasi, H 2 S ja enterotoksiine (kuni 10 liiki, mida iseloomustab surmav, hemolüütiline või nekrootiline toime). Mõned süsivesikud kääritatakse happe vabanemisega ilma gaasita. Lüsosüümi suhtes vastupidav, tundlik erinevate antibiootikumide suhtes. Inimestele patogeensetel liikidel on üks neljast toksilisuse faktorist, näiteks: 1) eksotoksiin, 2) enterotoksiin, 3) leukotsidiin, 4) koagulaas (patogeensuse ensüüm). Ristresistentsust antibiootikumide suhtes kontrollib R-plasmiid. Teistele prokarüootidele kantakse see resistentsuse tegur üle transduktsiooni teel.

Nakkuse edasikandumise allikad ja tegurid

Stafülokokid on oportunistlikud patogeenid. Nad on inimeste ja loomade normaalse mikrofloora esindajad - nad asustavad tihedalt erinevaid keha biotoope (nahk, nina limaskesta ja suu neelu, kõhuõõne ja aksillaarpiirkonnad). Stafülokokid sisenevad kehasse läbi naha ja limaskestade õhus lendlevate tilkade ja õhus lenduva tolmuga. Infektsiooni mehhanism on tavaliselt seotud patogeeni ülekandumisega kolonisatsioonipiirkondadest traumeeritud pinnale (nt nahale). Olulist rolli mängivad ka tihedad kontaktid kandjate ja stafülokokkide kahjustuste all kannatavate inimestega. Stafülokokk on vastupidav paljudele välismõjudele, seetõttu leidub teda väliskeskkonnas – õhus (tolm), pinnases, majapidamistarvetel. Stafülokoki infektsiooni edasikandumise allikaid ja tegureid on palju. Peamised allikad on stafülokoki infektsiooni kustutatud vormide või kandjatega patsiendid, harvemini haiged loomad, näiteks (toidustafülokoki mürgistuse ja enterokoliidiga) mastiidiga lehmad. Suurimat epidemioloogilist ohtu kujutavad meditsiinitöötajad, kes võivad olla staphylococcus aureuse haiglatüvede kandjad. Stafülokoki infektsiooni iseloomustavad mehhanismid, viisid ja ülekandetegurid. bakterid võivad edasi kanduda kontakti mittesteriilse meditsiiniinstrumendi kaudu meditsiinitöötajate käte kaudu, toitumine piimatoodete ja kondiitritoodetega, aerogeensed ja parenteraalselt(süstimisel).

Patogenees

Vastuvõtlikkus stafülokokkide suhtes on immuunpuudulikkusega inimestel väga madal ja immuunpuudulikkusega peremeesorganismidel suurenenud. Väga sageli areneb stafülokoki infektsioon sekundaarse immuunpuudulikkuse taustal. Patogeeni patogeensusteguriteks on mikrokapsel, rakuseina komponendid, agressiooniensüümid ja toksiinid. Mikrokapsel kaitseb baktereid fagotsütoosi eest, soodustab mikroobide adhesiooni ja levikut läbi kudede. Kasvamisel sisse vitro see ei moodustu. Rakuseina komponendid stimuleerivad põletikuliste reaktsioonide teket ja neutraliseerivad immunoglobuliine, immobiliseerivad fagotsüüte. Teiinhapped käivitavad kaskaadi kompliment(immunoloogiliste reaktsioonide komponent) alternatiivsel viisil. Stafülokoki agressiooniensüümi koagulaas eksisteerib kolmes antigeenses vormis ja põhjustab vereseerumi hüübimist. Paljude keha patoloogiliste seisundite korral lahkuvad stafülokokid oma tavalistest biotoopidest, ületavad koebarjääre ja viiakse vereringega keha sisemisse steriilsesse keskkonda. Seal tekitavad nad tüüpilise patoloogilise reaktsiooni – põletiku. See avaldub erineva lokaliseerimise ja raskusastmega mädane-põletikuliste protsesside kujul kuni sepsise ja septikopeemiani. Stafülokokid on haiguste etioloogiline tegur, millest valdav enamus on mäda-põletikulise iseloomuga. Bakterid võivad nakatada peaaegu kõiki kehakudesid. S. aureus'e põhjustatud infektsioonid on mitmekesised ja hõlmavad enam kui 100 nosoloogilist vormi, sealhulgas haigused: 1) nahk ja nahaalune kude(abtsessid, kurjategijad, furunkuloos jne), 2) hingamiselundid(tonsilliit, pleuriit, kopsupõletik jne), 3) närvisüsteem ja meeleelundid(meningiit, kõrvapõletik, konjunktiviit jne), 4) seedeorganid(stomatiit, peritoniit, enteriit, enterokoliit, toidumürgitus jne), 5) lihasluukonna süsteem ja sidekoe(artriit, osteomüeliit), 6) vereringe(endokardiit, flebiit jne), 7) kuseteede organid(tsüstiit, mastiit jne), 8) stafülokoki sepsis. Need haigused võivad olla ägedad või kroonilised. Toidumürgitus avaldub kliiniliselt oksendamise ja vesise kõhulahtisusena juba 2-6 tundi pärast nakatunud toiduainete – koorega maiustuste, konservide, liha- ja juurviljasalatite jms – söömist.

Tuvastamismeetodid

Selektiivsel diferentsiaalsöötmel kasvavad reeglina ainult stafülokokkide kolooniad. Oletame, et haiguse stafülokoki etioloogia võimaldab isoleerida stafülokoki puhaskultuuris. Uuringute jaoks valitakse biomaterjal sõltuvalt haiguse kliinilisest pildist. Toidustafülokoki mürgitusest eraldatud S. aureus tüvedes määratakse enterotoksiinide esinemine bioloogiliste ja immunoloogiliste testidega. Traditsiooniliste meetoditega saab stafülokoki infektsiooni tuvastamise esialgseid tulemusi saada 1-2 päeva pärast.

Klassikaline meetod

S. aureus'e tuvastamise meetod põhineb toote proovi ja/või selle proovi lahjenduste inokuleerimisel vedelasse selektiivsöötmesse, inokulatsioonide inkubeerimisel, kultiveerimisvedeliku subkultuuril agar-selektiivse diagnostilise söötme pinnal, kinnitus biokeemiliste tunnustega, et isoleeritud tüüpilised ja/või ebatüüpilised kolooniad kuuluvad S. aureusesse.

Stafülokokid avastas esmakordselt L. Pasteur aastal 1897. Neid uurisid üksikasjalikult A. Ogston (1882) ja F. Rosenbach (1884).

Morfoloogia. Stafülokokid (kreeka keelest staphyle - viinamarjakobar) on ümmarguste pallide kujul, mille läbimõõt on 0,5–1,5 mikronit. Paljunedes moodustavad nad viinamarjakobara kujul klastreid. See vorm on mikroobide eri tasapindade jagunemise tulemus. Mädas leidub aga üksikuid ja paariskokke. Stafülokokid on liikumatud, neil pole eoseid, nad moodustavad spetsiaalsetes kultiveerimistingimustes mikrokapsli ja on grampositiivsed.

kasvatamine. Stafülokokid on fakultatiivsed anaeroobid, kuid kasvavad paremini hapniku juuresolekul. Kasvab ja paljuneb tavalisel toitainekeskkonnal, kasvab hästi verega söötmel, optimaalsed tingimused - temperatuur 37 ° C, pH 7,2-7,4.

Valikulised söötmed on munakollase-soolagar ja soolaagar. MPA-l on stafülokoki kolooniad kumerad, ümarad, läbipaistmatud, läikivad, 2-4 mm suurused siledate servadega. Stafülokokkide kasvuga moodustub pigment: kuldne, sidrunkollane või valge. Pigment moodustub kõige paremini piimjas keskkonnas toatemperatuuril ja hajutatud valgusel. Stafülokoki pigment ei lahustu vees, lahustub atsetoonis, eetris, alkoholis jne. Mõnede stafülokoki tüvede kasvamisel verega agaril moodustub koloonia ümber hemolüüsi tsoon. Puljongil kasvamist iseloomustab ühtlane hägusus ja põhjas setted.

Ensümaatilised omadused. Stafülokokid toodavad sahharolüütilisi ja proteolüütilisi ensüüme. Sahharolüütilised ensüümid lagundavad happe moodustumisega mitmeid suhkruid: laktoosi, glükoosi, sahharoosi, maltoosi, glütserooli jt.

Stafülokoki proteolüütilised omadused väljenduvad võimes lahustada kaseiini, vedeldada želatiini (aeglaselt), lagundada teisi valgu substraate.

Stafülokokid toodavad patogeensusega ensüüme: 1) koagulaas (koaguleerib vereplasma); 2) hüaluronidaas (levifaktor); 3) letsitinaas (lahustab rakumembraani letsitiini); 4) fibrinolüsiin (lüüsib fibriini); 5) DNaas (depolümeriseerib DNA); 6) fosfataas jne.

Plasmakoagulaasi olemasolu võimaldab eristada Staphylococcus aureust teiste liikide stafülokokkidest. Paljud stafülokokid toodavad penitsillinaasi, mis hävitab penitsilliini.

toksiinide moodustumine. Stafülokokid toodavad eksotoksiine. Nende hulka kuuluvad nelja tüüpi hemolüsiinid, millest α-toksiin on kõige olulisem. Sellel on järgmised omadused: hemolüütiline - põhjustab erütrotsüütide hemolüüsi, dermonekrootiline - põhjustab nahasisesel manustamisel nekroosi, surmav - intravenoossel manustamisel põhjustab selle suhtes tundlike loomade surma.

Stafülokokid moodustavad lisaks hemolüsiinidele leukotsiidi, mis tapab leukotsüüte, kuut tüüpi enterotoksiine, mis põhjustavad toidumürgitust, ja kahte tüüpi eksfoliatiine, mis põhjustavad vastsündinutel epidermise koorumist.

Antigeenne struktuur. Stafülokokkidel on valgu antigeen A, mis on ühine kõigile Staphylococcus aureusele, ja polüsahhariidantigeenid: A, B, C.

Stafülokokid eritavad bakteriotsiini (stafülotsiine), millel on antagonistlik toime selle perekonna mikroorganismidele.

Kuldsete (harva epidermaalsete) stafülokkide hulgas eristatakse umbes 40 fagovari. Erinevatelt objektidelt isoleeritud stafülokoki kultuuride tundlikkuse määramine tüüpiliste faagide suhtes on väga epidemioloogilise tähtsusega (patogeeni allika ja ülekandeteede kindlakstegemisel).

Klassifikatsioon. Praegu on inimestelt eraldatud stafülokokid jagatud 3 liiki (tabel 23): S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus.

Märge. + käärimise olemasolu, stabiilsus, - käärimise puudumine, stabiilsus.

Keskkonnakindlus. Stafülokokid on üsna stabiilsed, nii et neid leidub õhus, pinnases, vees ja majapidamistarvetel. Temperatuuril 100 ° C surevad nad koheselt, temperatuuril 70 ° C - 10-15 minuti pärast. Nad taluvad hästi madalaid temperatuure. Külmutuna säilivad nad elujõulisena mitu aastat. Nad taluvad hästi kuivamist. Otsene päikesevalgus tapab nad alles mõne tunni pärast. Tavalised desinfektsioonivahendite lahused (näiteks sublimaadid lahjenduses 1:1000) tapavad need 15-20 minutiga. Mäda, valku, röga, fenooli sisaldava sekretsiooni neutraliseerimisel ei tohi kasutada. See desinfektsioonivahend põhjustab valkude hüübimist, mis takistab mikroorganismide suremist. Stafülokokid on briljantrohelise suhtes tundlikud.

Loomade vastuvõtlikkus. Stafülokoki suhtes tundlikud on suured ja väikesed veised, hobused, sead, kanad. Katseloomadest - küülikud, valged hiired ja kassipojad.

Nakkuse allikad. Haige inimene ja bakterikandja.

Edastamise marsruudid. Kontakt-majapidamine, õhutilk, õhk-tolm, toit.

Haigused inimestel. Püoderma, keeb, karbunklid, kurjategijad, abstsessid; erinevate organite ja kudede põletikulised protsessid; tonsilliit, tsüstiit, osteomüeliit, koletsüstiit, mastiit; sepsis ja septikopeemia; toidumürgitus ja paljud teised. Kirjeldatud on umbes 120 stafülokoki etioloogia nosoloogilist vormi.

Patogenees. Stafülokokid tungivad läbi naha ja limaskestade.

Staphylococcus aureus (S. aureus) on stafülokoki haiguste puhul esmatähtis. S. epidermidise ja S. saprophyticuse roll inimese patoloogias on vähem väljendunud. Patogeneesi määravad patogeeni omadused - ensüümid, eksotoksiinid, bakteriraku ained ja makroorganismi immuunsüsteemi seisund.

Sagedamini on kahjustatud nahk ja nahaalune kude - tekivad püodermatiit, keeb, panaritium. Sageli põhjustavad stafülokokid sekundaarseid haigusi, näiteks kopsupõletikku koos gripiga. Nad põhjustavad ka haavainfektsioone. Stafülokokkide roll sünnitusabis on eriti suur, kuna vastsündinud on nende suhtes väga tundlikud. Stafülokokihaiguste käigus on oluline allergia teke, mistõttu haigust iseloomustavad ägenemised.

Stafülokokihaiguste hulgas on eriline koht toidumürgitusel. Kliiniliselt kulgevad need toksikoosina, millega kaasneb oksendamine, kõhulahtisus, peavalu ja muud nähtused.

Immuunsus. Inimesel on loomulik resistentsus, mis on seotud mehaaniliste tegurite, fagotsütoosi ja antikehade olemasoluga. Põletikuline protsess, mis tekib patogeeni sissetoomise kohas, põhjustab stafülokokkide edasilükkamist ja raskendab nende levikut kogu kehas. Saadud fookuses läbivad stafülokokid fagotsütoosi.

Haiguse käigus moodustunud antitoksiin on oluline tegur üldises immuunkompleksis. Kuid omandatud immuunsus on ebastabiilne, seetõttu täheldatakse retsidiive.

Ärahoidmine. See taandub sanitaar- ja hügieenitingimuste parandamisele, patsientide ja bakterikandjate aktiivsele tuvastamisele ning haiglate korrektsele toimimisele.

Spetsiifiline profülaktika. Stafülokoki toksoid ja antistafülokoki immunoglobuliin.

Ravi. Antibakteriaalsed ravimid, polüvalentne stafülokoki bakteriofaag, antistafülokoki plasma ja immunoglobuliin. Mõnel juhul kasutatakse stafülokoki infektsioonide kroonilises käigus autovaktsiini.

Kontrollküsimused

1. Mille alusel ühendatakse kookid ühte rühma?

2. Milliseid ensüüme ja patogeensusfaktoreid toodavad stafülokokid?

3. Milliseid haigusi põhjustavad stafülokokid?

4. Milliseid stafülokokkide liike te teate?

Mikrobioloogilised uuringud

Uuringu eesmärk: stafülokokkide eraldamine ja tuvastamine.

Uurimismaterjal

1. Mäda (keeb, karbunklid, abstsessid).

2. Lima neelust (tonsilliit).

3. Flegm (kopsupõletik).

4. Uriin (püeliit ja põiepõletik).

5. Kaksteistsõrmiksoole sisu (koletsüstiit).

6. Veri (kahtlustatakse sepsist).

7. Oksendamine, maoloputus, toiduained (toidumürgitus).

8. Lima ninast (bakteriokandja uurimine).

Põhilised uurimismeetodid

1. Mikroskoopiline.

2. Mikrobioloogiline.

3. Bioloogiline.

Teadustöö edenemine

Kõik põllukultuurid asetatakse üheks päevaks termostaadi.

Stafülokokkide tuvastamine suletud abstsessist tekkinud mäda ja kateetriga võetud uriinisetete mikroskoopia abil võimaldab anda esialgse positiivse vastuse: tuvastati stafülokokk.

Teine uurimispäev

Tihedal ja vedelal toitainekeskkonnal olevad põllukultuurid eemaldatakse termostaadist ja uuritakse. Koloonia-soolagaril kasvatatud stafülokokikahtlusega kolooniaid sõelutakse agari kaldpinnal, et saada puhaskultuur ja seda edasi uurida. Sel juhul arvestatakse letsitinaasi olemasolu, mis väljendub koloonia ümber sillerdava korolla moodustumisel. Ülejäänud kolooniatega plaadid jäetakse pigmendi tuvastamiseks 2-3 päevaks toatemperatuurile seisma. Vaadake saaki verd sisaldava agariga tassidel. Kolooniad, mille ümber on selge hemolüüsitsoon (kliirens), eraldatakse agari kaldpinnal. Verekultuure suhkrupuljongis inkubeeritakse 10 päeva, 2-3 päeva pärast külvatakse need agarile vere ja munakollase-soola söötmega.

Kui tihedal toitainesöötmel kasvu ei toimu, inokuleeritakse puljong glükoosiga agaril verega. Põllukultuurid asetatakse päevaks termostaadi.

Uurimistöö kolmas päev

Võtke põllukultuurid termostaadist välja. Äärid tehakse kultuuridest, mis on isoleeritud kald agariga, värvitakse Grami järgi ja uuritakse mikroskoobiga. Gram-positiivsete stafülokokkide juuresolekul viiakse isoleeritud kultuuri edasine uuring läbi:

a) panna plasma koagulatsiooni reaktsioon;

b) uurida hemolüütilisi omadusi;

c) määrata DNaasi produktsiooni;

d) määrata mannitooli fermentatsiooni anaeroobsetes tingimustes;

e) määrata resistentsus novobiotsiini suhtes.

Plasma koagulatsiooni reaktsioon. Küülikuverest saadud tsitraatplasma lahjendatakse isotoonilise naatriumkloriidi lahusega vahekorras 1:4 ja valatakse kahte 0,3-0,5 ml sadestamistorusse. Ühte katsutisse sisestatakse uuritud kultuuri silmus, teine ​​katseklaas toimib kontrollina. Mõlemad katseklaasid asetatakse termostaati temperatuurile 37 ° C. Reaktsioon registreeritakse 2-3 tunni pärast Plasma hüübimise puudumisel jäetakse põllukultuurid 24 tunniks toatemperatuurile, seejärel võetakse reaktsioon. arvesse. Koagulaasi ensüümi juuresolekul plasma koaguleerub (ei valgu ümberpööratud torust välja). Kontrolltuubis plasma konsistents ei muutu.

Koagulaasi määramise kiirendatud meetod. Eraldatud kultuur suspendeeritakse steriilses veetilgas klaasklaasil, sellele lisatakse üks tilk lahjendamata plasmat. Positiivse reaktsiooni korral moodustuvad mikroobirakkudest 20-60 s jooksul suured helbed. Seda meetodit kasutatakse massiuuringutes.

Hemolüütiliste omaduste määramine. Tootma külvamist 5% verega agarile (tüved, mis toodavad α-hemolüsiini, annavad keskkonna valgustustsoonid ning küüliku- ja lambaverele, tootvad β-hemolüsiini, lüüsivad ainult lamba erütrotsüüte).

DNaasi definitsioon. Uuritud kultuur külvatakse DNA-d sisaldavale söötmele. Põllukultuure inkubeeritakse. 18-20 tunni pärast lisatakse kasvanud stafülokoki kolooniatega tassi 5-7 ml vesinikkloriidhappe lahust. DNA reageerib happega ja keskkond muutub häguseks. Kui eraldatud kultuur toodab ensüümi DNaasi, depolümeriseerib see DNA ja hägusust ei teki.

Mannitooli lagunemine anaeroobsetes tingimustes. Uuritavale kultuurile inokuleeritakse torke mannitooliga poolvedelagaril. Söötme pind on täidetud vaseliiniõliga. Inkubeerida 18-24 tundi temperatuuril 37 ° C. Positiivset reaktsiooni iseloomustab söötme värvuse muutus (söötmes on indikaator).

Uuringu neljas päev

Tulemused registreeritakse (tabel 24).

Märge. + positiivne reaktsioon.

Nende tunnuste olemasolu võimaldab eristada Staphylococcus aureust teiste liikide Staphylococcus aureus'est ja anda lõpliku vastuse: S. aureus isoleeriti (joonis 37).

Epidemioloogilise ahela kindlakstegemiseks määratakse isoleeritud kultuur faagitüüpi. Faagide tüpiseerimine võib kinnitada erinevatelt patsientidelt ja keskkonnaobjektidelt eraldatud stafülokokkide identiteeti.

Faagide tüpiseerimiseks kasutatakse faagide kriitilisi testlahjendusi. Kriitiline katselahjendus on faagide maksimaalne lahjendus, mille juures toimub vastava stafülokoki tüve poolkonfluentne lüüs.

Faagi trükkimise tehnika. Valage 20 ml 1,5% MPA-d Petri tassi, laske sellel tahkuda ja kuivatage termostaadis 30-40 minutit. Agari pinnale kantakse 1 ml 4-6-tunnist isoleeritud stafülokoki kultuuri, jaotatakse kogu tassi pinnale, liigne vedelik imetakse ära või lastakse lahtises anumas termostaadis aurustuda. Varem on tassi põhi jagatud sektoriteks või ruutudeks. Ruudude või sektorite arv peaks vastama kasutatud faagide arvule. Seejärel kantakse igale ruudule või sektorile üks faag.

Tassid asetatakse termostaadi temperatuurile 37 ° C. Tulemused määratakse 6-7 tunni pärast.Kui tassid jäetakse toatemperatuurile, siis fagolüüs registreeritakse 18-24 tunni pärast.

bioloogilised proovid. Test kultuuri surmavate omaduste määramiseks. Toksiini surmava toime tuvastamiseks süstitakse küülikule intravenoosselt (või intraperitoneaalselt) stafülokoki puljongikultuuri filtraati kiirusega 0,1-0,2 ml filtraati 1 kg küüliku massi kohta. Küüliku surm 3-4 päeva pärast näitab toksiini surmava toime olemasolu.

Dermonekrootiline test. Katse tehakse küülikuga (selle toksiini suhtes kõige tundlikum loom). Eelnevalt kitkutakse karv looma küljelt või seljalt ja nahasiseselt süstitakse 0,2 ml stafülokoki kultuuri kahemiljardilist suspensiooni isotoonilises naatriumkloriidi lahuses. Kui isoleeritud kultuuris on nekrootilised omadused, moodustub süstekohas infiltraat, millega kaasneb nekroos.

Reaktsiooni võetakse arvesse 24-18 tunni pärast.

Saadud stafülokokikultuuri tundlikkust antibiootikumide suhtes testitakse paberketta meetodil (vt ptk 9).

Kontrollküsimused

1. Millist materjali uuritakse stafülokokkide põhjustatud haiguste puhul?

2. Millised on peamised laboratoorsete uuringute meetodid stafülokokkide tuvastamiseks?

3. Millise meetodiga määratakse plasma koagulatsioonireaktsioon?

4. Millist keskkonda kasutatakse stafülokokkide hemolüütiliste omaduste tuvastamiseks?

5. Mis on faagitüüpimise eesmärk?

Harjutus

Kontrollige, millise antibiootikumi suhtes on isoleeritud Staphylococcus aureuse kultuur tundlik.

Toiteainekeskkond

Chistovitši munakollase-soola-agar. Valmistage munakollasegu (1 munakollane 150 ml steriilse isotoonilise naatriumkloriidi lahuse kohta). Liha-peptoonsoola agarile (8-10% naatriumkloriid), mis on sulatatud ja jahutatud temperatuurini 45 °C, lisage 20% munakollase suspensioon (jälgige steriilsust) ja valage tassidesse.

agar verega. Vaata 7. peatükki.

Soolapuljong, soolaagar. Neid valmistatakse nagu tavalisi söötmeid - MPB ja MPA, ainult naatriumkloriidi lisatakse suuremas koguses (8-10%). Puljong valatakse kolbidesse, katseklaasidesse, agar - tassidesse.

Stafülokokid on sfäärilised grampositiivsed: liikumatud asporogeensed bakterid perekonnast Staphylococcus perekonnast Micrococcaceae. Avastasid 1880. aastal iseseisvalt L. Pasteur ja A. Ogston ning uurisid lähemalt F. Rosenbach 1884. aastal.

1976. aastal kiideti Rahvusvahelise Stafülokoki Taksonoomia Komitee poolt ametlikult heaks järgmised kolm liiki: S.aureus, S.epidermidis ja S.saprophyticus. Praeguseks on kirjeldatud 19 loomadelt ja inimestelt eraldatud stafülokoki liiki.

Stafülokokid on loomade nakkuspatoloogias olulised: need mikroobid võivad mõjutada praktiliselt kõiki organeid ja kudesid. Need põhjustavad paise, abstsesse, flegmoone, osteomüeliiti, mastiiti, endometriiti, bronhiiti, kopsupõletikku, meningiiti, püeemiat ja septitseemiat, enterokoliiti, toidutoksikoosi, lindude stafülokokoosi.

Morfoloogia. Stafülokokid on sfäärilised rakud, mille läbimõõt on 0,5-1,5 mikronit. Mäda- ja noorpuljongikultuuridest valmistatud preparaatides paiknevad need üksikult, paarikaupa, lühikeste vahudena või väikeste rühmadena; agarkultuuride määrdudes – ja üksikute ebakorrapärase kujuga kobaratena, mis meenutavad viinamarjakobarat. Neil ei ole lippe ega kapsleid, nad ei moodusta eoseid. Värvuvad hästi aniliinvärvidega, on grampositiivsed, vanades kultuurides värvuvad üksikud rakud gramnegatiivselt.

Kasvatamine. fakultatiivsed anaeroobid. Nad kasvavad hästi universaalsel toitainekeskkonnal. temperatuuril 35–40 ° C (kasv on võimalik vahemikus 6,5–46 ° C), optimaalne pH 7,0–7,5. Glükoosi või vere lisamine toitainekeskkonda kiirendab stafülokokkide kasvu. Enamiku tüvede iseloomulik omadus on võime kasvada 15% naatriumkloriidi või 40% sapi juuresolekul. MPA-l moodustavad nad ümaraid kolooniaid, mis on agari pinnast veidi kõrgemal tõusnud, siledate servadega, läbimõõduga 2–5 mm. Kolooniad võivad olla värvilised, kuna stafülokokid toodavad vees lahustumatuid karotenoidpigmente. Pigmendid tekivad kõige intensiivsemalt 10% lõssi sisaldaval agaril pärast 24-tunnist inkubeerimist temperatuuril 37 ° C ja kartulitel temperatuuril 20–25 ° C aeroobsetes tingimustes valguses. S.aureus sünteesib kuldset või oranži pigmenti. , leidub ka pigmendita tüvesid, S. epidermidis toodab tavaliselt valget või kollast pigmenti, enamikul S. saprophyticuse tüvedel pigment puudub.

MP6-st kasvades põhjustavad stafülokokid algul hajusa hägusust, millele järgneb lahtise flokuleeriva sette kadu. Iseloomulikult kasvab želatiini veerus. 18–26 tunni pärast täheldatakse koos rohke kasvuga süstimise ajal söötme esialgset veeldamist, mis seejärel suureneb, ja 4.–5. päevaks moodustub süstimise ajal vedelikuga täidetud lehter. Vereagaril moodustavad stafülokokkide patogeensed tüved olulise hemolüüsipiirkonna.

biokeemilised omadused. Stafülokokid fermenteerivad glükoosi, maltoosi, fruktoosi, sahharoosi, ksüloosi, glütseriini, mannitooli ilma gaasita happe moodustumisega ega lagunda dultsiiti, salitsiini, inuliini, rafinoosi. Eraldage ammoniaak ja vesiniksulfiid, ei moodusta indooli, redutseerivad nitraadid nitrititeks; toota katalaasi, fosfataasi, ureaasi; patogeensed tüved - arginaas. Kalgendada ja peptolüüsida piima, vedeldada želatiini, mõnikord kalgendatud vereseerumit.

Stafülokokkide proteolüütiline aktiivsus võib aga olla väga erinev.

Toksiinide moodustumine. Patogeensed stafülokokid sünteesivad ja eritavad väga aktiivseid eksotoksiine ja ensüüme. Eksotoksiinidest eristatakse nelja tüüpi hemotoksiine (stafülolüsiinid), leukotsidiini ja enterotoksiine.

Hemotoksiinide hulka kuuluvad alfa-, beeta-, gamma- ja deltahemolüsiinid.

Alfa-hemolüsiin põhjustab erütrotsüütide lüüsi lammastel, sigadel, koertel, omab surmavat ja dermatonekrootilist toimet, hävitab leukotsüüte, agregeerib ja lüüsib trombotsüüte.

Beeta-hemolüsiin lüüsib inimeste, lammaste ja veiste erütrotsüüte; see on küülikutele surmav.

Gamma-hemolüsiini leidub inimestelt eraldatud tüvedes, selle bioloogiline aktiivsus on madal.

Delta-hemolüsiin põhjustab erütrotsüütide lüüsi inimestel, hobustel, lammastel, küülikutel, hävitab leukotsüüte.

Kõik stafülokoki hemolüsiinid on membranotoksiinid: nad on võimelised lüüsima eukarüootsete rakkude membraane.

Leukotsidiin on mittehemolüütiline eksotoksiin, mis põhjustab leukotsüütide degranulatsiooni ja hävimist.

Entsrotoksiinid on termostabiilsed polüpeptiidid, mis tekivad enterotoksigeensete stafülokokkide paljunemisel toitainetes, toiduainetes (piim, koor, kodujuust jne), sooltes. Vastupidav seedeensüümide toimele. Tuntud on kuus antigeenset varianti. Enterotoksiinid põhjustavad inimese toidutoksikoosi, nende suhtes on tundlikud kassid, eriti kassipojad ja koerakutsikad.

Stafülokokkide patogeensusfaktoriteks on ka ensüümid koagulaas, hüaluronidaas, fibrinolüsiin, DNaas, letsitovitellaas jne. Koagulaas on bakteriaalne proteinaas, mis koaguleerib loomade vereplasma. Koagulaasi olemasolu on stafülokokkide patogeensuse üks olulisemaid ja püsivamaid kriteeriume.

Antigeenne struktuur. Stafülokokkide puhul on kõige paremini uuritavad rakuseina antigeenid: peptidoglükaan, teikhoiinhapped ja valk A. Peptidoglükaan on stafülokokkide tavaline antigeen. Teichoiinhapped on liigispetsiifilised polüsahhariidantigeenid. S.aureus sisaldab ribitolteikohapet (polüsahhariid A), S. epidermidis sisaldab glütseriinteikohapet, mida nimetatakse polüsahhariidiks B. A-valku leidub Staphylococcus aureuses. See on madala molekulmassiga valk, millel on võime seonduda imetajate IgG Fc fragmentidega. Tüvedel, mis toodavad suures koguses A-proteiini, on suurem resistentsus fagotsütoosi suhtes. Staphylococcus aureuse mukoidsetes tüvedes tuvastati ka kapsli polüpeptiidne antigeen.

Jätkusuutlikkus. Stafülokokid on suhteliselt resistentsed mikroorganismid. Otsene päikesevalgus tapab nad alles mõne tunni pärast. Tolmu sees püsivad 50–100 päeva, kuivanud mädanikus üle 200 päeva, puljongikultuuris 3–4 kuud, poolvedelagaril 6 kuud. Vedelas keskkonnas temperatuuril 70 °C surevad nad 1 tunni pärast, 85 °C juures 30 minuti pärast, 100 °C juures mõne sekundi pärast. Desinfektsioonivahenditest tapab 1% formaliinilahus ja 2% naatriumhüdroksiidi lahus need 1 tunni jooksul, 1% klooramiini lahus - 2-5 minuti pärast. Stafülokokid on briljantrohelise ja püoktaniini suhtes väga tundlikud.

Paljud tüved on tundlikud bensüülpenitsilliini, poolsünteetiliste penitsilliinide, streptomütsiini, klooramfenikooli, tetratsükliini, fusidiini ja teiste antibiootikumide, samuti nitrofuraani preparaatide suhtes. Siiski on palju antibiootikumiresistentseid tüvesid. Neid iseloomustab üldiselt mitme ravimiresistentsus, mida kontrollib R-plasmiid ja mis võib levida transduktsiooni teel. Stafülokokid, mis sünteesivad penitsillinaasi (beetalaktamaasi), on võimelised hävitama mõningaid penitsilliini. Stafülokokid on sulfoonamiidide suhtes väga vastupidavad.

Patogeensus. Loomade ja inimeste nakkuspatoloogias on peamine roll S. aureusel. Stafülokokkinfektsioone võivad põhjustada ka S. epidermidis ja S. saprophyticus. Pigmendi moodustumine ja süsivesikute lagunemine ei saa olla stafülokokkide patogeensuse kriteeriumiks. Peamised tegurid, mis määravad nende bakterite patogeensuse, on võime toota eksotoksiine ning ensüüme koagulaas, fibrinolüsiini ja hüaluronidaasi.

Stafülokokkide suhtes on tundlikud hobused, suured ja väikesed veised, sead, pardid, haned, kalkunid, kanad, küülikud, valged hiired ja laboriloomade kassipojad. Küülikutele patogeensete stafülokokkide kultuuri intradermaalsel süstimisel tekib põletik ja seejärel nahanekroos, kultuuri filtraadi intravenoossel süstimisel küülikutele tekib äge mürgistus ja surm mõne minuti pärast.

Patogenees. Stafülokokid sisenevad kehasse kahjustatud naha ja limaskestade kaudu, enterotoksiinid - koos toiduga.

Stafülokoki infektsioonid arenevad sagedamini ja kulgevad raskemalt organismi loomuliku vastupanuvõime languse ja immuunpuudulikkuse seisundite korral. Stafülokoki protsesside patogeneesis on juhtiv roll eksotoksiinidel ja patogeensusensüümidel. Olulised võivad olla ka allergiad. Kõik need tegurid kokku määravad, kas tekivad lokaalsed püopõletikulised kolded, siseorganite süsteemsed haigused, sepsis või toidutoksikoos.

Laboratoorsed diagnostikad. Uurida haavaeritist, abstsesside mäda, mastiidiga haavu, piima, endometriidiga suguelundite eritumist, septitseemiaga kägiveeni verd.

Patoloogilisest materjalist valmistatakse määrded, mis värvitakse mikroskoopiliselt Grami järgi. Otsene mikroskoopia võimaldab anda ainult esialgse vastuse. Samal ajal külvatakse materjali vere-, piimasoola- ja munakollase-agariga nõudesse.

Patogeensed tüved moodustavad vereagaril kolooniate ümber hemolüüsi tsooni. Piima-soolagariga tassidel arvestatakse pigmendi teket. Kollasoolagaril põhjustab enamik patogeenseid stafülokokke letsitovitellaasi reaktsiooni, mis väljendub koloonia ümber häguse tsooni moodustumisel, mille äärealadel on sillerdav õieke. Puhta kultuuri saamiseks ja edasiseks uurimiseks sõelutakse iseloomuliku koloonia materjal MPA-le. Puhaskultuur tehakse mikroskoopiliselt, mille järel viiakse läbi plasma koagulatsioonireaktsioon küüliku tsitraadi vereplasmaga. Koagulaasi ensüümi juuresolekul plasma koaguleerub. Lisaks määratakse anaeroobsetes tingimustes DNaasi ja mannitooli lõhustumine.

Küülikutel avastatakse kultuuri surmavad omadused ja tehakse dermatonekrootiline test. Sel eesmärgil süstitakse küüliku naha raseeritud piirkonda intradermaalselt 0,2 ml 2 miljardit kultuuri suspensiooni. Positiivsel juhul tekib süstekohas infiltraat ja tekib nekroos.

Erinevalt teistest liikidest fermenteerib S. aureus mannitooli anaeroobsetes tingimustes. Patogeensetel stafülokokkidel on lisaks hemolüütilisele ja letsitinaasi aktiivsusele võime koaguleerida plasmat, põhjustada nahanekroosi ja hävitada DNA-d.

Küüliku surm viitab toksiini surmava toime olemasolule.

Kui on vaja kindlaks teha stafülokoki infektsiooni esinemise allikas ja levimisviisid, tehakse isoleeritud kultuurid faagitüpiseerimisele. Rahvusvaheline stafülokoki faagide komplekt koosneb 22 tüübist, mis on jagatud 4 rühma. Enterotoksiinid toiduainetes ja kultuurides määratakse RDP-s stafülokoki antiseerumiga enterotoksiinide A, B, C, D, E, F suhtes.

Seoses ravimite suhtes resistentsete stafülokokkide tüvede laialdase levikuga määratakse isoleeritud kultuuride tundlikkus antibiootikumide suhtes tihedal söötmel paberketaste või koopiate meetodil. See on ratsionaalse keemiaravi valikul väga oluline.

Immuunsus. Tervetel loomadel on loomulik resistentsus stafülokoki infektsiooni suhtes. See on tingitud naha, limaskestade barjäärifunktsioonist, fagotsütoosist ja spetsiifiliste antikehade olemasolust, mis on sünteesitud varjatud immuniseerimise tulemusena. Samuti takistab see mikroobide levikut organismis põletikulise reaktsiooni tõttu patogeeni sissetoomise kohas.

Immuunsus stafülokokkide infektsioonide korral on valdavalt antitoksiline, madala intensiivsusega ja lühiajaline. Seetõttu pole sagedased retsidiivid välistatud. Sellegipoolest suurendavad kõrged antitoksiinide tiitrid loomade veres nende vastupanuvõimet korduvatele haigustele. Antitoksiinid mitte ainult ei neutraliseeri eksotoksiine, vaid põhjustavad ka fagotsüütide kiiret mobilisatsiooni.

Stafülokokid kutsuvad esile ka hilinenud tüüpi ülitundlikkust. On teada, et korduvad stafülokoki nahakahjustused põhjustavad rohkem väljendunud hävitavaid muutusi.

Biopreparaadid. Pakutakse välja puhastatud adsorbeeritud stafülokoki toksoid ja autovaktsiin - haige looma kehast eraldatud stafülokoki agarkultuuri pesemine, mida kuumutatakse temperatuuril 70–75 ° C. Mõnikord lokaalselt rakendatud faagi ja viirusetõrje filtraat 2-3-nädalase kultuuri staphylococcus aureus.

Saada oma head tööd teadmistebaasi on lihtne. Kasutage allolevat vormi

Üliõpilased, magistrandid, noored teadlased, kes kasutavad teadmistebaasi oma õpingutes ja töös, on teile väga tänulikud.

Majutatud aadressil http://www.allbest.ru

Sissejuhatus

20. sajandi teisel poolel muutusid patogeensed stafülokokid, mis on paljud mikroorganismid välja tõrjunud, erinevate raskete haiguste peamisteks põhjustajateks.

Nende hulka kuuluvad kopsupõletik, kopsuabstsessid, meningiit, peritoniit, sepsis, endokardiit, toksiline enteriit, kuseteede põletikud, günekoloogilised haigused, mädased tüsistused pärast vigastusi ja operatsioone, keskkõrvapõletik, sünnitusjärgne mastiit jt. Patogeenne stafülokokk võib põhjustada ka toidumürgitust, mis avaldub epideemiapuhangutena.

Stafülokoki infektsioonide uurimise olulisust on vaevalt võimalik üle hinnata. Seoses stafülokokkide infektsioonide laialdase levikuga on stafülokokkhaiguste laboratoorse diagnostika ja ennetamise uuringud väga olulised.

Looduses - elusmaailmas, keskkonnas, õhus - on stafülokokkide patogeensed (patogeensed) ja kahjutud (mittepatogeensed) sordid väga levinud.Patogeenne stafülokokk on õhu sanitaar-indikatiivne mikroorganism.

Nii patogeensete kui ka mittepatogeensete stafülokokkide uurimisel on kõige keerulisem ja olulisem asi kultuuri kasvatamise aeg. Stafülokoki puhaskultuuri eraldamiseks kulub 2-3 päeva.

Töö eesmärgiks on uurida stafülokoki tekitajat ja nende tuvastamist mikrobioloogilises diagnostikas.

· Uurida stafülokokkide morfoloogiat.

· Uurida stafülokokkide kultuurilisi omadusi.

· Uurida stafülokokkide biokeemilisi omadusi.

· Uurida stafülokokkide toksiinide moodustumist ja antigeenset struktuuri.

Stafülokokkide resistentsuse uurimiseks.

· Kirjeldage patogeneesi ja kliinikut.

Kirjeldage klassifikatsiooni.

Analüüsige Staphylococcus hemolyticust.

Analüüsige Staphylococcus epidermidis't.

· Analüüsida Staphylococcus saprophyticust.

Analüüsige Staphylococcus aureust.

· Kirjeldada laboridiagnostika meetodeid.

Ajaloo viide.

Patogeense stafülokoki (Staphylococcus aureus) avastas R. Koch (1878), paise mädast eraldas L. Pasteur (1880), mida kirjeldas A. Auguston (1881) kui paljude mädanemisprotsesside põhjustajat, mida uuris üksikasjalikult F. Rosenbach (1884) kreekakeelsest väljendist "viinamarjakobar".

1. Stafülokokkide tunnused

Staphylococcus on Micrococcaceae perekonda kuuluv bakter.

Nende mikroorganismide oht seisneb selles, et nad toodavad toksiine ja ensüüme, mis on rakkudele patogeensed ja häirivad nende elutähtsaid funktsioone. Bakteritel on hävitav toime sidekudedele, nahale ja nahaalusele koele. Need põhjustavad mitmeid ohtlikke haigusi, sealhulgas sepsist, toksilist šokki ja teisi. Sageli on stafülokoki infektsiooniga seotud tüsistused pärast mitmesuguseid haigusi.

1.1 Morfoloogilised tunnused

Kõik stafülokokkide tüübid on sfäärilise kujuga. Erinevates allikates on nende suurus erinev. Suuruse keskmine väärtus on 0,5 kuni 2 mikronit. Määrides on nende kultuurid paigutatud viinamarjakobarate kujul. Patoloogilises materjalis võib neid leida eraldi lamavate üksikute kokkide, diplokokkide, lühikeste ahelate kujul. Nad ei moodusta eoseid, neil puuduvad lipud. Mõnel stafülokoki tüvel on kapsel. Penitsilliini ja teiste ainete mõjul võivad stafülokokid moodustada L-vorme. Stafülokokid värvivad hästi aniliinvärvidega ja on grampositiivsed. Nad on fakultatiivsed anaeroobid.

1.2 Kultuuriväärtused

Stafülokokid on aeroobid ja fakultatiivsed anaeroobid. Nad arenevad hästi tavalisel toitainekeskkonnal temperatuuril 10°C kuni 43°C (optimaalne 30-37°C) pH 7,2-7,6 juures. Kasv on võimalik ka kergelt happelises keskkonnas. Stafülokokid põhjustavad BCH hajutatud hägusust, millele järgneb väike sade. 2-3 päeva pärast moodustub puljongi pinnale kile ja parietaalne rõngas. MPA-l kasvavad stafülokokid kumerate, siledate servadega kolooniatena läbimõõduga 1–4 mm.

Temperatuuril 20-25°C hapniku juurdepääsu ja hajutatud valguse juures toodavad stafülokokid kuldseid, valgeid, sidrunkollaseid, oranže ja muid pigmente, mis on lipokroomid, katalaaspositiivsed, oksüdaasnegatiivsed. Kasvatage 5-10% NaCl-ga söötmel.

Selektiivsete söötmetena on pakutud: munakollase-soola-agar, piima-soola-agar jne. Kõige sagedamini kasutatav sööde on JSA (kollane-soolagar), mis võimaldab tuvastada patogeensete stafülokokkide kolooniaid juba põhikultuurides.

Kollasoolagaril kasvades moodustuvad patogeensete stafülokokkide kolooniate ümber sillerdavad korollad ja hägused tsoonid. Piima-soolagaril on stafülokoki kolooniad siledate servadega ketaste kujulised, moodustades erinevaid pigmente (kuldseid, valgeid jne).

Stafülokokkide morfoloogia ja kultuuriomaduste sarnasuse tõttu kootakse toitesöötmel kasvatatud kolooniad kaldu liha-peptoonagarile ja tuvastatakse: viiakse läbi plasma koagulatsioonireaktsioon (küüliku tsitraatplasmat koaguleerima võimelised patogeensed stafülokokid lüüsitakse tavaliselt faagide poolt), katalaasi test, kultuurid viiakse läbi süsivesikute söötmel mannitooliga jne.

Samuti on ebausaldusväärne patogeensete stafülokokkide määramine nende võime järgi tekitada vereagaril kasvades hemolüüsi. Nende mikroobide hemolüütiline võime varieerub suuresti sõltuvalt mitmest tegurist: kasutatud vere tüübist, antigoksiini sisaldusest selles, erütrotsüütide kontsentratsioonist agaris, keskmise kihi paksusest jne. Seetõttu on praktikas hemolüütiline märk ei võimalda püogeensete (patogeensete) stafülokokkide eristamist saprofüütilistest liikidest. Seetõttu võetakse sanitaar- ja mikrobioloogilistes uuringutes arvesse ainult püogeensete stafülokokkide tüüpilisi koagulaas-positiivseid tüvesid.

Plasma koagulatsiooni reaktsioon. Üks bakterisilmus agarit või 0,1 cm3 puljongit 18-24-tunnise uuritava mikroorganismi kultuur viiakse katseklaasi 0,5 cm3 steriilse vereplasmaga, inkubeeritakse 37 °C juures ja tulemus võetakse arvesse 30 minuti pärast. , 2,4 ja 24 tundi.positiivne tulemus moodustab tiheda või lahtise trombi. Kui kasutati lahjendatud plasmat, hõljub tromb vedelikus.

1.3 Biokeemilised omadused

Stafülokokkidel on sahharolüütilised ja proteolüütilised omadused. Sahharolüütilised ensüümid lagundavad happeks laktoosi, glükoosi, mannitooli, sahharoosi, maltoosi, glütserooli. Stafülokoki proteolüütilised omadused väljenduvad želatiini, kaseiini ja teiste valkainete vedeldamisel.

1.4 Toksiinide moodustumine ja antigeenne struktuur

Stafülokokkide patogeensed omadused tulenevad võimest toota eksotoksiine ja agressiooniensüüme. Praegu on stafülokoki toksiine nelja tüüpi: alfa (a), beeta (b), delta (d), gamma (y). Need on iseseisvad ained ja põhjustavad erütrotsüütide lüüsi, neil on surmav ja nekrootiline toime. Need omadused ei väljendu erinevat tüüpi toksiinides võrdselt. Toksiinide enim uuritud hemolüütilised omadused, seetõttu nimetatakse neid sageli hemolüsiinideks. Stafülokokkide hemolüütilist võimet saab määrata nakatamise teel vereagarile, millel 18-24 tunni pärast on stafülokoki koloonia ümber nähtav hemolüüsi tsoon. Nekrootilist toimet saab kindlaks teha, süstides küülikule intradermaalselt stafülokoki kultuuri. 24-48 tunni pärast tekib süstekohas nahanekroos (positiivne dermonekrootiline test). Surmavad omadused määratakse 0,2-0,4 ml stafülokoki toksiini intravenoosse manustamisega küülikule. Looma surm saabub 5-10 minutiga.

Alfatoksiin on enim uuritud. Viitab tõelistele toksiinidele. Hävitab küüliku ja jäära erütrotsüüte, nõrgalt - inimese erütrotsüüte. Termolabiilne. Sellel on surmav ja nekrootiline toime. Sellel on antigeensed ja immunogeensed omadused ning see muundatakse kergesti toksoidiks.

Deltatoksiini toodavad peamiselt stafülokokkide tüved, mis on eraldatud patsientide patoloogilisest materjalist. Mõjub inimese ja hobuse erütrotsüütidele. Põhjustab küülikute surma 125 mikrogrammi puhastatud toksiini intravenoossel manustamisel. Antigeensed omadused on nõrgalt väljendunud, seda ei tõlgita toksoidiks.

Gammatoksiin on halvasti mõistetav. Põhjustab erütrotsüütide lüüsi küülikutel, lammastel ja inimestel. Termolabiilne.

On kindlaks tehtud, et patogeensed stafülokokid eritavad aineid, millel on kahjulik mõju inimese leukotsüütidele ja erinevatele loomaliikidele. Neid aineid nimetatakse leukotsidiinideks. Stafülokokkide puhul on kirjeldatud nelja tüüpi leukokokke. Neil on antigeensed omadused. Loomade immuniseerimisel on võimalik saada immuunseerumit, millel on võime neutraliseerida mürgi leukotsütolüütilist toimet.

Patogeensed stafülokokid on võimelised tootma enterotoksiini, mis põhjustab toidumürgitust. Stafülokoki toidumürgitus tekib pärast stafülokokkide poolt tootes paljunemise ajal eritatud enterotoksiini sisaldava toidu allaneelamist. Stafülokoki enterotoksiini oluline omadus on selle kuumakindlus. Seetõttu võivad enterotoksiini sisaldavad tooted isegi pärast kuumtöötlemist põhjustada toidumürgitust.

Viimastel aastatel on mõnedes patogeensetes stafülokokkides leitud spetsiaalne eksotoksiin, mis sai nimeks Staphylococcus, mis eritavad seda tüüpi toksiine, põhjustavad naha eksfoliatiivseid kahjustusi (vastsündinutel pemfigus, lokaalne bulloosne impetiigo, sarlakid sarnane lööve).

Toksiliste ainete hulka kuuluvad stafülokokkide poolt sekreteeritud agressiooniensüümid:

1) plasmakoagulaas, mis põhjustab vereplasma hüübimist;

2) hüaluronidaas, mis lagundab sidekoe põhiaine hulka kuuluvat hüaluroonhapet;

3) fibrinolüsiin, mis lahustab fibriini;

4) fosfataas. Lisaks on kindlaks tehtud, et stafülokokkide patogeensed omadused on seotud nende võimega toota desoksüribonukleaasi (DNA-aasi), letsitovitellaasi, lipaasi ja lüsosüümi. Stafülokokid võivad toota antibiootilisi aineid – bakteriotsiine (stafülotsiine). On kindlaks tehtud, et stafülotsiinid mitte ainult ei inhibeeri teiste stafülokoki tüvede kasvu, vaid neil on ka difteeriabatsillide, aga ka erinevat tüüpi batsillide ja klostriidide pärssimine.

Antigeenne struktuur pole hästi mõistetav. Eraldatud on umbes 30 polüsahhariiditüübispetsiifilist antigeeni ja üks tavaline valguantigeen. Nende antigeenide jaoks saadi aglutineerivad ja sadestavad seerumid. Kuid üsna suur hulk stafülokoki kultuure ei allu seroloogilisele tüpiseerimisele.

1.5 Keskkonnasäästlikkus

Stafülokoki leidub neerudes, õhus, vees ja majapidamistarvetes.

Patogeensetest mikroobidest on stafülokokid väliskeskkonnas kõige stabiilsemad. Nad taluvad hästi külmumist, säilitades samal ajal elujõulisuse mitu aastat, ja kuivamist, olles tulevikus tolmu (õhu) nakkuse allikaks. Otsene päikesevalgus tapab stafülokokid mõne tunni jooksul. Kuumutamisel 70°C-ni surevad nad 1 tunni jooksul, 80°C-ni - 10-20 minuti pärast. Stafülokokid on erinevate kemikaalide toimele vähem vastupidavad: 0,1% sublimaadi lahus ja 3% karboolhappe lahus tapavad nad 15-30 minuti jooksul, 1% kloramiini lahus - 2-5 minuti pärast. Stafülokokid on vastupidavad naatriumkloriidi kõrgele kontsentratsioonile. Seetõttu kasutatakse nende eraldamisel saastunud materjalist kõrge NaCl sisaldusega (7–10%) toitekeskkonda. Stafülokokid muutuvad kiiresti antibiootikumide suhtes resistentseks. Eriti levinud on penitsilliiniresistentsed tüved, kuna stafülokokid sisaldavad ensüümi penitsillinaas. Stafülokokid on briljantrohelise suhtes tundlikud.

1.6 Patogenees ja kliinik

Nagu juba märgitud, on stafülokokid väliskeskkonnas laialt levinud. Need on inimese naha ja limaskestade saprofüüdid. Tervetel inimestel on koos mittepatogeensete patogeensete stafülokokkidega üsna levinud. Nende domineeriv lokalisatsioon on nina ja kurgu limaskestad. On kindlaks tehtud, et ainult väikesel osal inimestest organismis puudub pidevalt patogeenne staphylococcus aureus.

Enamikul inimestel on see perioodiliselt ja mõned inimesed on püsivad kandjad. On olemas kategooria "pahatahtlikud" kandjad, mille ninaneelus esineb pidevalt ja suurel hulgal teatud faagitüüpe antibiootikumide suhtes resistentseid patogeenseid stafülokokke, mida nimetatakse "epideemiaks", kuna need põhjustavad sageli haiglates massilisi stafülokoki haigusi. Sellised kandjad, eriti meditsiinitöötajate seas, aga ka stafülokokihaigusi põdevad isikud, on haiglates peamine stafülokoki nakatumise allikas.

Stafülokokid mängivad patoloogias tohutut rolli. Nad põhjustavad väga erinevaid mädaseid haigusi: naha ja nahaaluskoe pustuloosseid kahjustusi, tonsilliiti, keskkõrvapõletikku, kopsupõletikku, uretriiti, koletsüstiiti, enterokoliiti, sepsist jne. Nende roll on eriti suur sünnitusabi ja günekoloogia praktikas ning kirurgias. Stafülokokid põhjustavad vastsündinutel kõige sagedamini mädaseid-põletikulisi haigusi kuni generaliseerunud infektsioonini - sepsis, mastiit sünnitajatel, mädased tüsistused pärast operatsiooni kirurgilistel patsientidel. Patoloogilist protsessi põhjustavad tavaliselt patogeensed stafülokokid. Vähenenud resistentsusega isikutel võib aga nakkusprotsess olla tingitud mittepatogeensest staphylococcus aureusest. Stafülokoki haigused on rasked, kõrge suremusega, eriti väikelastel ja nõrgestatud patsientidel.

Nakkus levib peamiselt kontakti või õhu kaudu. Mõne haiguse korral (pustuloossed nahahaigused, tonsilliit jne) võib infektsioon olla endogeenne.

Stafülokokihaigustest on erilisel kohal toiduainete (enamasti piima-, liha- ja magustoitude) tarbimisest tingitud toidumürgitused, mille puhul toimus stafülokoki paljunemine ja enterotoksiinide kuhjumine.

Neil on suurim osakaal mikroobse iseloomuga toidumürgituste hulgas. Stafülokoki toidumürgitust nimetatakse toksikoosiks, kuna iseloomulik kliiniline pilt (korduv oksendamine, peavalu, südame nõrkus, mõnikord ka kõhulahtisus) ei ole põhjustatud stafülokoki toimest, vaid selle enterotoksiinist.

1.7 Klassifikatsioon

· Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), kui inimesele kõige patogeensem. Nimetatud tänu oma võimele moodustada kuldset pigmenti. Inimesel võib see põhjustada mädaseid põletikulisi protsesse peaaegu kõigis elundites ja kudedes.

· Staphylococcus epidermidis (Staphylococcus epidermidis) – esineb sageli inimese nahal ja limaskestadel, võib põhjustada sepsist, endokardiiti, konjunktiviiti, haavade mädapõletikku ja kuseteede mädaseid infektsioone.

Staphylococcus saprophyticus (Staphylococcus saprophyticus) – võib põhjustada ägedat põiepõletikku ja uretriiti.

Hemolüütiline stafülokokk (Staphylococcus haemolyticus)

1.8 Hemolüütiline Staphylococcus aureus

Hemolüütiline stafülokokk (Staphylococcus haemolyticus) provotseerib statistika kohaselt viiskümmend protsenti juhtudest tonsilliidi ja tonsilliidi. See on tingitud asjaolust, et kahjustatud on peamiselt hingamisteede limaskestad. Ärritus kiirendab põletikulist protsessi. Ekspertide sõnul on sellest mikroorganismist peaaegu võimatu täielikult vabaneda. Staphylococcus aureuse ravi on suunatud sümptomite leevendamisele. Ravi ajal pärsitakse patoloogiliste bakterite aktiivsust. Tuleb märkida, et meditsiinipraktikas on hemolüütiline staphylococcus aureus vähem levinud kui kuldne. Just viimane on erinevate mädaprotsesside peamine põhjus. Patoloogiad hõlmavad eelkõige kopsupõletikku, mastiiti, keskkõrvapõletikku. Sageli põhjustab staphylococcus aureus toidumürgitust. Väliselt võib infektsiooniga kaasneda lööve.

Haiguse kliiniline pilt. Stafülokokk ninaneelus või mandlites on reeglina rahulikus "magamis" olekus. Kuid mitmed tegurid (näiteks hüpotermia) võivad seda aktiveerida, provotseerida paljunemist. Inkubatsiooniperiood kestab tavaliselt umbes nelikümmend kaheksa tundi.

Selle aja jooksul asuvad mikroorganismid aktiivselt kõri, levivad läbi hingamiselundite. Pärast seda hakkavad ilmnema patoloogia kliinilised sümptomid. Eelkõige tunneb patsient valu kurgus, mis muutub intensiivsemaks aevastamisel, neelamisel, köhimisel, vestluse ajal. Suurenenud on ka mandlid, võimalik, et temperatuuri tõus. Patsient võib tunda nõrkust, halb enesetunne. Kurgu piirkonnas on naha punetus. Lisaks on tõenäoline tüsistuste tekkimine: keskkõrvapõletik, sarlakid, kaelasõlmede põletik.

Teraapia. Sümptomid leevenduvad antibiootikumidega. Siiski tuleb märkida, et mikroorganismidel on võime ravimitega kiiresti harjuda. Sellega seoses tuleb diagnoosimisel bakteritüvi selgelt määratleda. Lisaks on pikaajalise ravi ajal soovitatav ravimeid perioodiliselt vahetada. Sageli aktiveerub hemolüütiline stafülokokk raseduse ajal. Sellisel juhul määratakse ravimid sõltuvalt perioodist. Arstid määravad õrnad antibiootikumid. Lisaks soovitatakse sümptomite leevendamiseks kasutada paikseid preparaate. Selliste vahendite hulka kuuluvad mitmesugused ninatilgad, loputused, kurgu niisutamine. Pärast ravikuuri määrab arst uuringu: külvamine bakterile. Isegi kui leitakse mikroorganism, ei tähenda see tõsise haiguse olemasolu. Sellistel juhtudel soovitavad eksperdid tugevdada tervist, suurendades immuunsust. Raseduse ajal tuleks menüüsse lisada rohkem juur- ja puuvilju (värskeid), vältida närvilisi, stressirohke olukordi, emotsionaalseid seisundeid. Me ei tohiks unustada, et iga inimest ründavad miljonid patoloogilised bakterid. Tuleb öelda, et hemolüütiline stafülokokk ei hõlma alati antibiootikumide võtmist. Sõltuvalt patoloogia staadiumist valib arst sobiva ravi.

Saprofüütset stafülokokki (Staphylococcus saprophyticus) peetakse kõige rahumeelsemaks ja see mõjutab lapsi harva. Selle peamiseks elupaigaks on põie sein ja nahk suguelundite lähedal, mistõttu on lihtne aimata, et see on põiepõletiku tekitaja, millele naised vastuvõtlikumad on.

Ja kuigi statistika järgi leidub seda mikroorganismi 5%-l uuritutest, ei põhjusta see üldse haigusi. Kui inimesel on tugev immuunsus, siis on ta ainult staphylococcus aureuse kandja. Kui keha kaitsefunktsioonid on nõrgenenud, hakkab bakter aktiivselt paljunema, mis väljendub tsüstiidi standardsümptomites:

urineerimise rikkumine (kusepidamatus ja sagedane tung);

valulik urineerimine;

Põletav valu kõhukelmes ja sügelus;

Võimalikud on üldised mürgistusnähud, nagu pearinglus, nõrkus, iiveldus jne, kuid need ei ole nii häirivad.

Harvadel juhtudel võib saprofüütne staphylococcus aureus põhjustada neerupõletikku ja koos põiepõletikuga tuleb ravida ka püelonefriiti.

2. Staphylococcus aureus'e ravi

Staphylococcus saprophyticus'e ravi taandub näidustatud antibiootikumide kasutamisele, rääkimata iseenesestmõistetavast sümptomaatilisest ravist, mis hõlmab dušitamist, sooja vanni ja taimsete ravimite kasutamist. Antibiootikumikuuri tuleks aga võtta võimalikult tõsiselt ja see lõpuni ära juua ka siis, kui valulikud sümptomid on juba lakanud häirimast Stafülokoki pärssimine toob kaasa mürgistusbakterite arvu suurenemise, kuna organism vajab surnud mikroorganismide ja nende elutegevuse toksiliste saaduste eemaldamiseks.Antibiootikumide ühekordsel kasutamisel hukkub suurem osa stafülokokkidest ning ülejäänud mikroorganismid ei saa enam sama jõuga paljuneda ja "rünnata", mistõttu patsient tunneb kergendust. Kui aga lõpetate antibiootikumide võtmise, on võimalik haiguse varajane retsidiiv, mida on palju raskem ravida.

Fakt on see, et ülejäänud stafülokokid muutuvad resistentseks, st. on selle ravimi suhtes resistentne ja juba on vajalik tugevamate ravimite kasutamine koos võimalike süsteemsete kõrvaltoimetega. Lisaks suurendab iga järgnev stafülokoki mutatsioon selle ellujäämisvõimet kõige raskemates tingimustes.

Saprofüütse stafülokoki ravi raseduse ajal.

Seda tüüpi bakterid on eriti väljendunud raseduse ajal, kuna seda soodustab nõrgenenud immuunsus, muutunud hormonaalne tase ja vastuvõtlikkus erinevatele stressidele. Põhimõtteliselt väljendudes kerge põiepõletikuna, mõnikord saab sümptomaatilise raviga hakkama. Kui aga naine on ohus, s.t. oli enne rasedust raske põiepõletik või isegi püelonefriit, on vaja alustada täielikku ravi õrnade antibiootikumidega.

Kolmandal trimestril ei ole need beebile nii ohtlikud moodustunud platsenta tõttu, mis võib patoloogilisi mõjusid tagasi lükata. Kuid stafülokoki kahjulik levik võib olla palju ohtlikum, nii et kui ilmnevad esimesed tsüstiidi sümptomid, peate kvalifitseeritud spetsialisti poolt läbi vaatama.

Epidermaalne stafülokokk.

Epidermaalne staphylococcus aureus (Staphylococcus epidermidis) on erinevalt "Staphylococcus aureusest" inimese naha normaalse mikrofloora esindaja, seega ei suuda see tervele inimesele praktiliselt kahju tekitada. See areneb peamiselt nõrgestatud kõhnunud inimestel, düsbakterioosihaigetel, rasedatel ja hiljuti opereeritud või intensiivraviosakondades. Mikroob siseneb kehasse haavade, veresoonte ja kuseteede kateetrite ning drenaaži kaudu. Sellega seoses võib tekkida veremürgitus või südame sisekesta põletik (endokardiit). Seetõttu on Staphylococcus epidermidis paljude siseproteesimisega tegelevate kirurgide peamine karistus. Kuna kui veresooned ja tehisklapid nakatuvad, siis selle mikroobiga.

Implantatsiooniaegne infektsioon kulgeb tavaliselt pikka aega latentselt. Neuropeeniaga patsientidel areneb välja ulatuslik baktereemia koos raske mürgistusega, mis võib lõppeda surmaga. Veresoonte implantaatide nakatumine põhjustab valeaneurüsmide teket, mis võib hiljem ohustada ka patsiendi elu.

Naistel mõjutab Staphylococcus aureus'e infektsioon kusiti, põhjustades pindmiste kudede põletikku. Esiteks tekivad ebameeldivad valud kõhus, kehatemperatuur ulatub 40 kraadini, tervislik seisund halveneb, võivad ilmneda mitmesugused nahalööbed akne näol. Tüsistuste korral on vajalik kiire haiglaravi. Kuid kõigepealt peab arst läbi viima haiguse täieliku diagnoosi, seejärel, võttes arvesse stafülokoki mõju tugevust, määrab abiravimite (ensüümid, vitamiinid ja teised) kuuri.

Epidermise staphylococcus aureuse ravi.

Parim viis haiguste ennetamiseks on isiklik hügieen. Stafülokokihaiguste ravi on üsna keeruline ülesanne, kuna pole sellist mikroobi, mida saaks võrrelda võimega arendada resistentsust antibakteriaalsete ainete ja antibiootikumide suhtes. Penitsilliini kasutamine tõestas seda tõsiasja. Sellest järeldub järeldus, et antibiootikumide kasutamine ei ole üldse vajalik, nagu tõendab toidumürgitusega seotud juhtum. See stafülokokkhaigus ei vaja antibiootikume, sest siin ei mängi rolli mitte mikroob, vaid selle toksiinid.

Praegu võimaldavad uued bakterioloogilised meetodid mitte ainult tuvastada epidermise staphylococcus aureust, vaid ka määrata tundlikkust ravimite suhtes. Nende meetodite põhjal määrab arst sobiva ravi.

Kurb on see, et ülekantud nakkus ei jäta pikaajalist immuunsust. Väga kiiresti võib inimene nõrgenenud immuunsüsteemiga uuesti haigestuda. Antikehad tekivad ühe stafülokoki toksiinidele, mida organism ei suuda veel määrata.

Staphylococcus aureus.

Kõige sagedamini moodustub Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) ninakäikudes, aksillaarses piirkonnas. Kroonilised kandjad on raviasutuste töötajad, atoopilise dermatiidiga patsiendid, narkomaanid.

Tervetel inimestel on stafülokoki peamine sadam ninaõõs. Kuigi võib juhtuda, et nad elavad kõris, kõhukelmes, aksillaarpiirkonnas, seedetraktis ja peanahas.

20% alla 2-aastastest lastest võivad olla Staphylococcus aureus'e kandjad. Nakkus settib ninaõõnde. Juba 4–6-aastaselt avaldub see 30–50% lastest. Täiskasvanutel on kandjate osakaal 12–50%.

Pärast haiglaravi on patsientide protsent 20–30. See kehtib rohkem nende patsientide kohta, kes on võtnud antibiootikume, põevad diabeeti või mõnda nakkushaigust või saavad hemodialüüsi. Haiglates põhjustavad Staphylococcus aureus'e tüved mädapõletikke ja haavainfektsioone. Haavainfektsioone võivad põhjustada ninakäikudes esinevad stafülokokid.

Haiglate ja polikliinikute töötajate hulgas ulatub Staphylococcus aureus'e kandjate osakaal 35% -ni.

Pärast esimest menstruatsiooni naistel võib 5-15 protsendil juhtudest ilmneda staphylococcus aureus. Menstruatsiooni ajal see protsent suureneb ja võib ulatuda kuni 30% naistest.

Mõnedel tüvedel on tekkinud resistentsus antibiootikumide suhtes, nagu tsefalosporiinid ja penitsilliinid (oksatsilliin, naftsilliin, dikloksatsilliin, metitsilliin). Neid nimetatakse ka metitsilliiniresistentseks Staphylococcus aureuseks. Ja iga aastaga selliste tüvede arv kasvab. Nakkuse võite püüda igas avalikus kohas. Selle suremus on 30%.

Staphylococcus aureuse tuvastamine.

Staphylococcus aureuse kogust saate määrata, analüüsides düsbakterioosi väljaheiteid. Kontrollimine toimub kahtluse korral, sünnitushaiglates, meditsiinipersonali perioodilise läbivaatuse käigus. Kuna Staphylococcus aureus on ainus koagulaaspositiivne patogeenne staphylococcus aureus, tehakse test koagulaasitestiga.

Staphylococcus aureuse klassid.

Meditsiinis peetakse normiks, kui testitulemuste järgi tuvastatakse 4. astme stafülokokk, selline tulemus nõuab minimaalset ravi.

See hõlmab ennetavaid meetmeid, immuunsuse säilitamist, beriberi vabanemist.

Kindlaksmääratud stafülokokid 10–4 kraadi ei ole väga ohtlikud, kuid sellest hoolimata on ravi vajalik, eriti kuna Staphylococcus aureust on erinevalt teistest kõige raskem ravida. Esiteks ei tohiks lubada sõltuvust antibiootikumist, mille määrab eranditult arst, ja teiseks tuleb hoida immuunsüsteemi heas vormis, mis toob kaasa mikrofloora taastamise kehas. Ravikuur tuleb läbida lõpuni, vastasel juhul jääb allesjäänud Staphylococcus aureus ellu ja muutub selle ravi suhtes haavamatuks.

Staphylococcus aureuse sümptomid.

Staphylococcus aureus põhjustab mädaseid ja põletikulisi protsesse mitte ainult nahal, vaid ka erinevatel elunditel, avaldub akne, paise, karbunkuli, lööbe, mädase mastiidi kujul imetava ema rinnal. Kui infektsioon satub nina-neelu limaskestale, võib see olla tonsilliidi, sinusiidi, keskkõrvapõletiku ja muude ülemiste hingamisteede haiguste tekke põhjuseks. Kui infektsioon satub vastsündinu kopsudesse, võib see põhjustada rasket kopsupõletikku, luude kahjustuse korral osteomüeliit, neerud - südame püelonefriit - endokardiit ja loetelu jätkub. Halvim, mis juhtuda võib, on veremürgitus, mis toob kaasa sepsise. See võib olla naba sepsis, pemfigus, mida nimetatakse ka "põletatud beebi sündroomiks", see tähendab laia mädase nahakahjustusega.

Kui stafülokokk satub soolestikku, väljendub see seedetrakti rikkumises, tekib mürgistus. Immuunsus haiguse vastu ei ole moodustatud, seega peate uuesti nakatumisel olema ettevaatlik.

Märgid, mis viitavad stafülokoki infektsioonile:

Lisaks paisetele, vistrikutele ja mitmesugustele muudele nahahaigustele võib esineda sarlakid sarnaseid põletikke. See viitab keha sisemisele kahjustusele, osteomüeliidile, näiteks sepsisele. Pahaloomulise sepsise korral peate olema ettevaatlik, kuna see võib isegi põhjustada aju sepsist.

Kulg on äge ja kiire, esineb tugev palavik, õhupuudus, hüpereemia, võib tekkida tahhükardia. Kopsupõletikku pole välistatud.

· Imetava ema rinnal võib tekkida mädane mastiit. Sel juhul söötmine peatatakse.

5.-6. päeval tõuseb temperatuur ja soolestiku mürgistus järsult.

· Kui on stafülokokist põhjustatud kurguvalu, siis see näeb välja nagu streptokokk, aga penitsilliini ei ravita.

pikaajaline sepsis

toksiline šokk

Staphylococcus aureuse ravi.

Ülesanne on väga raske, kuid reaalne. Peate olema kannatlik ja mitte jooksma. Pärast antibiootikumide tundlikkuse testi läbimist peab arst määrama tervikliku ravi. Ravi viib läbi dermatovenereoloog. Tavaliselt kasutatakse sulfa ravimeid ja antibiootikume. Kuna just Staphylococcus aureusel on selline omadus, et tal tekib resistentsus antibiootikumide suhtes, siis pole ravi lihtne ülesanne, eriti kui kehakahjustus ei teki esimest korda.

Pärast ravikuuri analüüse korratakse ja täieliku paranemise korral ravi katkestatakse. Kui on olemas 4. astme stafülokokk, peate võtma ennetavaid meetmeid, kõrvaldama beriberi, järgima isikliku hügieeni reegleid, vältima vigastusi ja jälgima higistamist.

Laboratoorsed diagnostikad.

Uurimismeetodid:

1. Mikroskoopiline

2. Bakterioloogiline

Materjal uurimistööks:

1) Mäda - paise, karbunkuli, abstsessiga;

2) Lima kurgust - tonsilliidiga;

3) Röga - kopsupõletikuga;

4) Uriin põiepõletikuga;

5) Kaksteistsõrmiksoole sisu - koletsüstiidiga;

6) Veri – kui kahtlustatakse sepsist;

7) Maoloputus, toidujäägid toidumürgituse kahtluse korral;

8) Haava väljutamine.

Mikroskoopilist meetodit aktsepteeritakse bakterioloogilise meetodi fragmendina.

Bakterioloogilise uurimise meetod.

Esimene päev.

Patsiendilt võetud biomaterjal satub mikrobioloogialaborisse.

Järgmisena külvatakse biomaterjal JSA-le (kollane-soolagar), MSA-le (piimasoolagar) ja vere-agarile. Pange 24 tunniks 37C termostaadi. Sepsise kahtluse korral inokuleeritakse 10-15 ml verd pudelitesse suhkrupuljongiga 1:10 Kitt-Tarozzi söötmes, et isoleerida anaeroobne stafülokokk, asetada 24 tunniks termostaati temperatuurile 37 °C. 20 päeva jooksul külvatakse vereagar.

Teine päev.

Kultuuriväärtuste uurimine:

a) JSA patogeensetel stafülokokkidel - koloonia ümber moodustub hägusus sillerdava (pärli)korolla kujul, kuna stafülokoki letsitoviitelaas lagundab toitekeskkonna letsitiini;

b) MCA-l – kolooniad on kollase, sidrunikollase või valge värvusega.

c) hemolüüsi tsooni CA-l.

Kahtlased kolooniad subkultuuritakse MPA-l (lihapeptoonagar), et eraldada puhas kultuur.

Kolmas päev

1. Määratakse isoleeritud kultuuri puhtus - preparaat värvitakse Grami järgi - määrdunud stafülokokid - Gr + kookid, mis on paigutatud viinamarjakobaratena.

2. Määrake patogeensed omadused:

a) puhaskultuurist viiakse läbi plasmokoagulatsioonireaktsioon, selleks lahjendatakse küüliku tsitraatplasma 1:5 soolalahusega, seejärel valatakse 0,5 ml 2 katseklaasi, sisestades bakterioloogilise silmusega katseklaasi stafülokoki puhaskultuuri, teine ​​katseklaas on kontroll (ilma inokulatsioonita). Reaktsioon registreeritakse 2,6 ja 18 tunni pärast (patogeenne stafülokokk toodab ensüümi koagulaasi ja põhjustab plasma koagulatsiooni - sade tarretise kujul, koagulatsiooni kontrollkatsutis ei toimu);

b) külvamine JSA-le – pärlmutterkoore arvestamine;

c) külvamine MPA-le 1% mannitooliga - süstitakse kolonni;

d) külv KA-le – hemolüütiliste omaduste tuvastamiseks.

3. Faagi tüpiseerimine – nakkusallika tuvastamiseks. Selleks kasutatakse 20 tüüpilist faagi. Petri tassi põhi on jagatud 20 identseks ruuduks. MPA koos glükoosiga valatakse Petri tassi. Stafülokoki puhaskultuur külvatakse pidevale murule ja igasse ruutu sisestatakse tüüpiline faag. Pange 24 tunniks 37C termostaadi.

4. Kultuuri külvamine MPA-le – kultuuriliste omaduste määramiseks.

5. Stafülokoki kultuuri külvamine pidevale murule, et teha kindlaks tundlikkus antibiootikumide suhtes.

Neljas päev.

Tulemuste arvestamine ja isoleeritud kultuuri tuvastamine:

1. Plasma hüübimisreaktsioon – positiivne;

2. JSA-l – pärlmutrist pärlmutter ümber koloonia;

3. Mannitooli lõhustamine anaeroobsetes tingimustes (söötme värvuse muutus);

4. Kolooniat ümbritseval kosmoselaeval on hemolüüsi tsoon;

5. Bakterite lüüs faagiga vastavas ruudus;

6. BCH hajutatud udu;

7. Kasvupeetuse tsooni määramine - võttes arvesse tundlikkust antibiootikumide suhtes.

Vastuse väljastamine: Eraldati Staphylococcus aureus (patogeenne).

Järeldus

patogeense stafülokoki toksiini kliiniline

Hoolimata asjaolust, et stafülokokid on ühed kõige kergemini tuvastatavad ja äratuntavad mikroorganismid, mille avastamiseks ei ole vaja keerulisi diagnostilisi meetodeid, on mikrobioloogidel praktilises töös siiski teatud raskusi oma põhjusliku rolli kindlakstegemisel mitmete erinevate haiguste puhul. Ühelt poolt ei ole uuritavas materjalis leitud patogeensete stafülokokkide esinemine alati nende etioloogilise tähtsuse veenev tõend. Teisest küljest, arvestades nende mikroobide bioloogilise aktiivsuse paljusid ilminguid, mis sõltuvad erinevatest teguritest, mida ei saa alati arvesse võtta, nende suurt varieeruvust ravimainete ja makroorganismi enda mõjul, on üsna raske tuvastada. Kolmas põhjus on seotud asjaoluga, et stafülokokid on normaalse mikrofloora esindajad tinglikult patogeensete mikroorganismide rühmast ja koos mittepatogeensete mikroorganismidega elavad inimese kehas patogeensed esindajad, levides samas väga ebaühtlaselt. inimkeha erinevatesse osadesse.

Bibliograafia

1) Mikrobioloogia, viroloogia ja immunoloogia alused K.S. Kamõšev.

2) Meditsiiniline mikrobioloogia - Pozdeev Oscar Kimovich.

3) Meditsiinilise mikrobioloogia õpik - A.M. Korlyuk.

4) Mikrobioloogia – F.K. Cherkes, L.B. Bogojavlensk.

Majutatud saidil Allbest.ru

...

Sarnased dokumendid

Stafülokoki tüübid ja leviku viisid. Fakultatiivsete anaeroobide kliinilised ilmingud. Kaasaegsed meetodid haiguse diagnoosimiseks. Kaasaegne lähenemine stafülokoki infektsioonide ravile. Inimese immuunsuse tugevdamine, sanitaar- ja hügieenistandardite järgimine.

esitlus, lisatud 22.10.2014


Uuritava haiguse etioloogia ja patogenees, patogeeni üldine kirjeldus ja selle toimemehhanism inimorganismis. Kliiniline klassifikatsioon ja lekete vormid, väljatöötamise eeldused. Diagnoos ja raviskeemi koostamine, prognoos.

esitlus, lisatud 17.02.2015


Leptospiroosi mõiste on nakkushaigus, mis põhjustab vere kapillaaride, maksa, neerude, lihaste kahjustusi. Leptospiroosi morfoloogia ja toonilised omadused, epidemioloogia, patogenees ja kliiniline pilt. Mikrobioloogilise diagnostika meetodid.

esitlus, lisatud 03.05.2015


Leukeemiad on kasvajahaigused. Nende klassifikatsioon sõltuvalt kasvajarakkude morfoloogilistest omadustest. Haiguse põhjused, kliiniline pilt, kulgemise etapid. Analüüsid ja uuringud, haiguse ravi spetsiifika.

esitlus, lisatud 31.10.2012


Leptospiroosi mõiste, selle põhjustaja. Morfoloogia ja toonilised omadused, kultiveerimine ja antigeenne struktuur. Haiguse epidemioloogia ja patogenees, kliiniline pilt ja mikrobioloogiline diagnostika. Leptospiroosi ennetamine ja ravi.

esitlus, lisatud 25.05.2015


Katku patogeeni mikrobioloogilised omadused. Infektsiooni edasikandumise viisid. Haiguse kliiniline pilt. Katku epidemioloogilised tunnused. Kirjeldused kolmest katku pandeemiast, mis on möödunud kahe aastatuhande jooksul. Katk tänapäeva maailmas.

abstraktne, lisatud 18.09.2013


Staphylococcus aureuse tüübid, epidermaalne, saprofüütiline ja hemolüütiline. Bakteri kõrge vastupidavus kuivamisele, külmumisele, päikesevalgusele ja kemikaalidele. Patogeeni edasikandumise viisid ja haiguse peamised kliinilised ilmingud.

esitlus, lisatud 13.11.2014


Endometrioosi määratlus. Osalemine rakuliste ensüümide, hormooniretseptorite, aga ka geenimutatsioonide haiguse mehhanismis. Suguelundite endometrioosi etioloogia, patogenees, klassifikatsioon ja kliiniline pilt. Haiguse diagnoosimine ja ravi.

esitlus, lisatud 23.09.2014


Anatoomia ja füsioloogia, "ägeda pimesoolepõletiku" määratlus, haiguse tüüpiline kliiniline pilt. Ägeda apenditsiidi kliinilised tunnused: diagnoos, sümptomid ja võimalikud tüsistused. Diagnoosi ja haiguse kulgu tunnused.

esitlus, lisatud 08.11.2013


Patogeeni eraldamine haiguse algperioodil mikrobioloogilise diagnostika, vereanalüüside, kolooniate uurimise käigus diferentsiaalsöötmel. Kaksteistsõrmiksoole sisu uurimine diagnostilistel eesmärkidel batsillikandjate uurimisel.