FISH-tehnika, fluorestsents in situ hübridisatsioon, töötati välja 1980. aastate keskel ja seda kasutatakse spetsiifiliste DNA järjestuste olemasolu või puudumise tuvastamiseks kromosoomides, samuti 6. kromosoomi tsentromeeril asuva alfa-DNA satelliidi CEP6 (6p11) tuvastamiseks. .1-q11. üks).

See andis tänu kasvajaantigeenide tuvastamisele olulise nihke melanotsüütilise päritoluga onkoloogiliste haiguste diagnoosimisel. Pahaloomulise kasvaja taustal määratakse mutatsioon kolmes antigeenis: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) ja CMM1 (1p). Sellega seoses on melanoomi ja selle prekursorite varajasel diagnoosimisel suur tähtsus objektiivse diferentsiaaldiagnostika võimalusel, mis põhineb melanotsüütiliste nahakasvajate geneetiliste omaduste määramisel.Tuumas, kus on uuritud geenide normaalne komplekt ja kromosoom 6, kaks RREB1 geeni värvusid punaseks, kaks MYB geeni on täheldatud kollasel, kaks CCND1 geeni rohelisel ja kaks kromosoomi 6 tsentromeeri sinisel. Diagnostika eesmärgil kasutatakse fluorestseeruvaid proove.

Reaktsiooni tulemuste hindamine: iga proovi 30 tuumas loendatakse punaste, kollaste, roheliste ja siniste signaalide arv, tuvastatakse neli erinevate geneetiliste häirete variantide parameetrit, milles proov on geneetiliselt kooskõlas melanoomiga. Näiteks vastab proov melanoomile, kui CCND1 geeni keskmine arv tuuma kohta on ≥2,5. Sama põhimõtte järgi hinnatakse ka teiste geenide koopiate arvu. Ravim loetakse FISH-positiivseks, kui on täidetud vähemalt üks neljast tingimusest. Proovid, milles kõik neli parameetrit on alla murdepunktide, loetakse FISH-negatiivseteks.

Kromosoomide spetsiifiliste DNA järjestuste määramine toimub biopsiaproovide või kirurgilise materjali lõikudel. Praktilises teostuses on FISH-reaktsioon järgmine: melanotsüütide tuumades DNA-d sisaldav testmaterjal töödeldakse selle molekuli osaliseks hävitamiseks, et lõhkuda kaheahelaline struktuur ja hõlbustada seeläbi juurdepääsu soovitud geenipiirkonnale. Proovid klassifitseeritakse DNA molekuli kinnituskoha järgi. Kliinilises praktikas FISH-reaktsiooni materjaliks on parafiinkoe ​​lõigud, määrded ja jäljendid.

FISH reaktsioon võimaldab leida muutusi, mis on toimunud DNA molekulis geeni koopiate arvu suurenemise, geeni kadumise, kromosoomide arvu muutuse ja kvalitatiivsete muutuste – geeni liikumise tagajärjel. lookused nii samas kromosoomis kui ka kahe kromosoomi vahel.

FISH reaktsiooni abil saadud andmete töötlemiseks ja kolme uuritud rühma geenide koopiaarvude vaheliste seoste uurimiseks kasutatakse Spearmani korrelatsioonikordajat.

Melanoomi iseloomustab koopiate arvu suurenemine võrreldes nevuse ja düsplastiliste nevustega.

Düsplastilise nevusiga võrreldes on lihtsal nevusel vähem koopiate arvu kõrvalekaldeid (st rohkem normaalseid koopiaid).

Otsustusreeglite koostamiseks, et ennustada, kas proov kuulub teatud klassi (lihtsa ja düsplastilise nevi diferentsiaaldiagnostika), kasutatakse "otsustuspuude" matemaatilist aparaati. See lähenemisviis on end praktikas tõestanud ja selle meetodi rakendamise tulemusi (erinevalt paljudest teistest meetoditest, näiteks närvivõrkudest) saab selgelt tõlgendada, et luua otsustusreegleid lihtsate, düsplastiliste nevi ja melanoomi eristamiseks. Kõigil juhtudel olid esialgsed andmed nelja geeni koopiate arvud.

Diferentsiaaldiagnostika otsustusreegli koostamise ülesanne on jagatud mitmeks etapiks. Esimeses etapis eristatakse melanoom ja nevus, võtmata arvesse nevuse tüüpi. Järgmises etapis koostatakse otsustusreegel lihtsate ja düsplastiliste nevi eraldamiseks. Lõpuks, viimases etapis on võimalik düsplastilise nevus düsplaasia astme määramiseks ehitada "otsuste puu".

Selline nevi alamülesanneteks klassifitseerimise ülesande jaotus võimaldab saavutada ennustuste suure täpsuse igal etapil. Sisendandmeteks otsustuspuu koostamiseks on andmed nelja geeni koopiate arvu kohta melanoomdiagnoosiga patsientidel ja mittemelanoomdiagnoosiga patsientidel (patsiendid, kellel on erinevat tüüpi nevus - lihtne ja düsplastiline). Iga patsiendi kohta on geenikoopiate numbrid saadaval 30 raku kohta.

Seega võimaldab diagnoosi ennustamise ülesande jagamine mitmeks etapiks koostada ülitäpseid otsustusreegleid mitte ainult melanoomi ja nevi eristamiseks, vaid ka nevi tüübi määramiseks ja düsplaasia nevuse düsplaasia astme ennustamiseks. Konstrueeritud "otsustuspuud" on selge viis diagnoosi ennustamiseks geenikoopiate arvu põhjal ja neid saab hõlpsasti kasutada kliinilises praktikas healoomuliste, pahaloomuliste ja pahaloomuliste melanotsüütiliste nahakasvajate eristamiseks. Kavandatav täiendav diferentsiaaldiagnostika meetod on eriti oluline hiiglaslike kaasasündinud pigmenteerunud nevi ja düsplastiliste nevi väljalõikamisel pediaatrilistel patsientidel, kuna selliste patsientide raviasutuste külastamisel täheldatakse suurt osa diagnostilistest vigadest. Kirjeldatud meetodi kasutamise tulemused on väga tõhusad, seda on soovitav kasutada pigmenteerunud nahakasvajate diagnoosimisel, eriti FAMM-i sündroomiga patsientidel.

Sünnieelse diagnoosi invasiivsed meetodid võimaldavad mitte ainult vaadata tulevikku ja usaldusväärselt ennustada, kas sündimata lapsel on endiselt oodata emakasisese väärarenguga seotud haigusi, vaid ka välja selgitada kaasasündinud patoloogiate olemus ja põhjused.

Igasugune teave on aga väärtuslik ainult siis, kui see on õigeaegne. Kui rääkida loote arenguseisundist, on analüüsitulemuste saamise kiirus ülioluline.

Seetõttu on geenidiagnostikas väga nõutud FISH-meetod, mis võimaldab võimalikult lühikese aja jooksul hinnata enamlevinud arenguanomaaliate esinemist embrüos.

FISH on lühend, mis dešifreerib kromosoomianomaaliate tuvastamise tehnoloogia olemuse – fluorestsents in situ hübridisatsioon – fluorestsentshübridisatsioon "kodukeskkonnas".

See tehnika, mille pakkusid välja eelmise sajandi 70. aastate lõpus J. Goll ja M.-L. Pardew põhineb võimalusel taastada nukleiinhappefragmentide (DNA või RNA) järjestus pärast nende denatureerimist.

Autorid on välja töötanud meetodi, mis võimaldab kunstlikult loodud märgistatud DNA sondide (sondide) ja analüüsiks võetud tsütogeneetilise materjali in situ hübridisatsiooni abil tuvastada huvipakkuvate kromosoomide kvantitatiivseid ja kvalitatiivseid kõrvalekaldeid.

Möödunud sajandi lõpus, pärast fluorestsentsvärvide edukat kasutamist DNA sondide värvimisel, sai FISH-meetod oma nime ning sellest ajast alates on seda intensiivselt täiustatud ja mitmekesine.

Tänapäevased FISH-analüüsi meetodid püüavad anda võimaluse kogutud geneetilise materjali analüüsiks saada kõige täielikumat teavet ühe hübridisatsiooniprotseduuriga.

Fakt on see, et pärast hübridiseerimist saab hinnata ainult piiratud arvu sama tsütogeneetilise materjali kromosoome. DNA ahelate uuesti hübridiseerimise võime aeg-ajalt väheneb.

Seetõttu kasutatakse praegu geneetilises diagnostikas kõige sagedamini in situ hübridisatsiooni meetodit, et kiiresti vastata küsimustele kromosoomide 21, 13, 18, aga ka sugukromosoomide X, Y puhul levinumate aneuploidiate kohta.

FISH analüüsiks sobib iga koe- või rakuproov.

Sünnieelses diagnoosimises võivad need olla vereproovid, ejakulaat või.

Tulemuste saamise kiiruse tagab asjaolu, et analüüsiks võetud materjalist saadud rakke ei ole vaja toitekeskkonnas kultiveerida, saavutades nende jagunemise soovitud arvuni nagu klassikalises karüotüpiseerimise meetodis.

Valitud materjal valmistatakse spetsiaalselt kontsentreeritud puhta rakususpensiooni saamiseks. Järgmisena viiakse läbi DNA sondi ja uuritava proovi natiivse DNA denatureerimise protsess üheahelaliseks olekuks ja hübridisatsiooniprotsess, mille käigus inkubeeritakse värvitud DNA sonde proovi DNA-ga.

Seega visualiseeritakse soovitud (värvitud) kromosoomid rakus, hinnatakse nende arvu, geneetiliste struktuuride struktuuri jne. Spetsiaalse fluorestsentsmikroskoobi okulaar võimaldab arvestada helenduvate DNA ahelatega.

Praegu kasutatakse FISH-meetodit laialdaselt diagnostilistel eesmärkidel geneetiliste haiguste, kromosoomaberratsioonide avastamiseks reproduktiivmeditsiinis, onkoloogias, hematoloogias, bioloogilises dosimeetrias jne.

Kuidas kasutatakse loote FISH-diagnoosi?

Reproduktiivmeditsiini valdkonnas kasutatakse FISH-meetodit kui üht molekulaartsütogeneetilise diagnostika meetodit kõikides etappides.

• paar.

Tulevaste vanemate karüotüübi määramiseks tehakse see üks kord, kuna inimese genoom on kogu elu jooksul muutumatu.

Paari kariotüüpimine enne lapse eostamist aitab kindlaks teha, kas vanemad on pärilike, sealhulgas varjatud geneetiliste patoloogiate kandjad. Nagu ka tulevaste emade ja isade genoomi üldine seisund, mis võib mõjutada lapse eostamise ja raseduse kandmise edukust.

Sel juhul toimib FISH-diagnostika sageli täiendava uuringuna klassikalisele karüotüpiseerimisele, kui uuritavas materjalis (vanemate veeniveres) tuvastatakse kromosoomipatoloogiaid, kui kahtlustatakse mosaiiksust.

Täiendav uurimine FISH-meetodiga kinnitab või lükkab usaldusväärselt ümber kahtlustatava anomaalia olemasolu tulevase vanema rakkudes.

• Ejakulaadi uuring.

See on näidustatud "meesfaktori" tõttu paaril paljunemisraskuste korral. Sperma analüüs FISH-meetodiga võimaldab teil hinnata ebanormaalsete spermatosoidide taset kromosoomikomplekti osas, samuti teha kindlaks, kas mees on suguga seotud geneetiliste haiguste kandja.

Kui paar hakkab hiljem viljastama IVF-i kaudu, võimaldab ejakulaadi FISH-analüüs valida munaraku viljastamiseks kõrgeima kvaliteediga sperma.

• IVF-iga.

Implantatsioonieelseks geneetiliseks diagnoosimiseks (PGD). Vanemate karüotüübi uuringute tulemuste põhjal tehakse kindlaks võimalikud kromosomaalsed ja geneetilised aberratsioonid, mis võivad embrüole üle kanda.

Tänu FISH-diagnostika võimalustele saab tekkivate embrüote geneetilise tervise uuringu läbi viia loetud tundidega enne emakaõõnde siirdamist, et tagada teadaolevalt terve loote raseduse algus.

Lisaks võimaldavad PGD võimalused määrata embrüote sugu ja sellest tulenevalt ka "tellida" vajadusel sündimata lapse sugu.

• Raseduse perioodil.

Sünnieelses diagnostikas: koorionivilluse biopsia, amniotsenteesi või kordotsenteesiga saadud looterakkude analüüs FISH-meetodil, meditsiinikeskused pakuvad tavaliselt lisaks klassikalisele looterakkude geneetilisele uuringule (karüotüpiseerimine).

See meetod on hädavajalik, kui on vaja kiiresti saada vastus levinumate kromosoomidefektide esinemise kohta lootel: trisoomia kromosoomidel 21, 18, 13, aberratsioonid kromosoomidel X ja Y, mõnikord ka aneuploidiad kromosoomidel 14 (või 17), 15, 16.

FISH-analüüsi eelised

Geneetilise analüüsi läbiviimine FISH-meetodil, kuigi see on tänapäeval kromosomaalsete patoloogiate diagnoosimise abimeetod, määravad selle rakendamise otstarbekuse vaieldamatud eelised:

• testitud kromosoomide tulemuste saamise kiirus - mõne tunni jooksul - mitte rohkem kui 72.

See võib olla oluline, kui raseduse saatus sõltub geneetikute diagnoosist;

• FISH meetodi kõrge tundlikkus ja usaldusväärsus – edukas analüüs on võimalik tühiselt väikesel biomaterjali kogusel – piisab ühest rakust, tulemuste viga ei ületa 0,5%.

See võib olla oluline, kui rakkude arv esialgses proovis on piiratud, näiteks kui nende jagunemine on halb.

• FISH-diagnostika võimalus igas raseduse staadiumis (alates 7. nädalast) ja mis tahes bioloogilisel proovil: koorioni fragmendid, lootevesi, looteveri jne.

Kust saada FISH-diagnostikat?

Moskvas kasutatakse FISH-meetodit loote kromosoomianomaaliate sünnieelseks diagnoosimiseks järgmistes meditsiinikeskustes:

Reeglina pakuvad kliinikud lisatasu eest FISH-i diagnostikateenust osana loote täielikust karüotüüpimisest invasiivse sekkumise teel. Ja reeglina on tulevased vanemad nõus lisatasu maksma, sest tänu FISH-meetodile saad paari päevaga oma beebi kohta kõige olulisema teada

Juht
"Onkogeneetika"

Zhusina
Julia Gennadievna

Lõpetanud Voroneži Riikliku Meditsiiniülikooli pediaatriateaduskonna. N.N. Burdenko 2014. aastal.

2015 - teraapiapraktika Voroneži Riikliku Meditsiiniülikooli teaduskonnateraapia osakonna baasil. N.N. Burdenko.

2015 - sertifitseerimiskursus erialal "Hematoloogia" Moskva hematoloogiauuringute keskuse baasil.

2015-2016 – VGKBSMP nr 1 terapeut.

2016 - kinnitati arstiteaduste kandidaadi lõputöö teema "Haiguse kliinilise kulgemise ja prognoosi uurimine aneemilise sündroomiga kroonilise obstruktiivse kopsuhaigusega patsientidel". Rohkem kui 10 publikatsiooni kaasautor. Geneetika ja onkoloogia teaduslike ja praktiliste konverentside osaleja.

2017 - täiendkoolitus teemal: "pärilike haigustega patsientide geeniuuringute tulemuste tõlgendamine".

Alates 2017. aastast residentuuri erialal "Geneetika" RMANPO baasil.

Juht
"Geneetika"

Kanivets
Ilja Vjatšeslavovitš

Kanivets Ilja Vjatšeslavovitš, geneetik, meditsiiniteaduste kandidaat, meditsiinilise geenikeskuse Genomed geneetikaosakonna juhataja. Venemaa meditsiinilise täiendõppe akadeemia meditsiinigeneetika osakonna assistent.

Ta on lõpetanud 2009. aastal Moskva Riikliku Meditsiini- ja Stomatoloogiaülikooli arstiteaduskonna ning 2011. aastal residentuuri erialal "Geneetika" sama ülikooli meditsiinigeneetika osakonnas. 2017. aastal kaitses ta meditsiiniteaduste kandidaadi väitekirja teemal: DNA segmentide (CNV) koopiaarvu variatsioonide molekulaarne diagnostika kaasasündinud väärarengute, fenotüübi anomaaliate ja/või vaimse alaarenguga lastel kasutades SNP suure tihedusega oligonukleotiidseid mikrokiipe. »

Aastatel 2011-2017 töötas ta Kliinilises Lastehaiglas geneetikuna. N.F. Filatov, föderaalse riigieelarvelise teadusasutuse "Meditsiini-geeniuuringute keskus" teaduslik nõustamisosakond. Aastast 2014 kuni praeguseni on ta juhtinud MHC Genomedi geneetikaosakonda.

Peamised tegevusalad: pärilike haiguste ja kaasasündinud väärarengute, epilepsia diagnoosimine ja ravi, päriliku patoloogia või väärarengutega lapse sündinud perede meditsiinigeneetiline nõustamine, sünnieelne diagnostika. Konsultatsiooni käigus viiakse läbi kliiniliste andmete ja genealoogia analüüs, et selgitada välja kliiniline hüpotees ja vajalik kogus geenitesti. Küsitluse tulemuste põhjal tõlgendatakse andmeid ja selgitatakse saadud infot konsultantidele.

Ta on üks projekti Genetics School asutajatest. Esitab regulaarselt ettekandeid konverentsidel. Ta peab loenguid geneetikutele, neuroloogidele ja sünnitusarstidele-günekoloogidele, aga ka pärilike haigustega patsientide vanematele. Ta on rohkem kui 20 artikli ja arvustuse autor ja kaasautor Venemaa ja välisajakirjades.

Erialaste huvide valdkond on kaasaegsete genoomi hõlmavate uuringute juurutamine kliinilises praktikas, nende tulemuste tõlgendamine.

Vastuvõtuaeg: K, R 16-19

Juht
"Neuroloogia"

Sharkov
Artem Aleksejevitš

Šarkov Artjom Aleksejevitš– neuroloog, epileptoloog

2012. aastal õppis ta Lõuna-Koreas Daegu Haanu ülikoolis rahvusvahelise programmi “Idamaine meditsiin” raames.

Alates 2012. aastast osalemine xGenCloudi geneetiliste testide tõlgendamise andmebaasi ja algoritmi korraldamises (https://www.xgencloud.com/, projektijuht - Igor Ugarov)

2013. aastal lõpetas ta N. I. nimelise Venemaa riikliku teadusuuringute meditsiiniülikooli pediaatriateaduskonna. Pirogov.

Aastatel 2013–2015 õppis ta föderaalses riigieelarvelises teadusasutuses "Neuroloogia teaduskeskus" neuroloogia kliinilises residentuuris.

Alates 2015. aastast töötab ta neuroloogina, teadurina akadeemik Yu.E. nimelises Pediaatria Teadusliku Uurimise Kliinilises Instituudis. Veltishchev GBOU VPO RNIMU neid. N.I. Pirogov. Samuti töötab ta neuroloogina ja arstina A.I nimelise Epileptoloogia ja Neuroloogia Keskuse kliinikute video-EEG monitooringu laboris. A.A. Ghazaryan“ ja „Epilepsiakeskus“.

2015. aastal õppis ta Itaalias koolis "2nd International Residential Course on Drug Resistant Epilepsies, ILAE, 2015".

2015. aastal täiendkoolitus - "Kliiniline ja molekulaargeneetika praktiseerivatele arstidele", RCCH, RUSNANO.

2016. aastal täiendkoolitus - "Molekulaargeneetika alused" bioinformaatika juhendamisel, Ph.D. Konovalova F.A.

Alates 2016. aastast - labori "Genomed" neuroloogilise suuna juhataja.

2016. aastal õppis ta Itaalias koolis "San Servolo rahvusvaheline edasijõudnute kursus: Brain Exploration and Epilepsy Surger, ILAE, 2016".

2016. aastal täienduskoolitus - "Innovaatilised geenitehnoloogiad arstidele", "Laborimeditsiini instituut".

Aastal 2017 - kool "NGS meditsiinigeneetikas 2017", Moskva Riiklik Teaduskeskus

Praegu viib ta läbi epilepsiageneetika alast teaduslikku uurimistööd MD professori juhendamisel. Belousova E.D. ja professor, d.m.s. Dadali E.L.

Kinnitati meditsiiniteaduste kandidaadi lõputöö teema "Varajaste epilepsia entsefalopaatia monogeensete variantide kliinilised ja geneetilised omadused".

Peamisteks tegevusvaldkondadeks on epilepsia diagnoosimine ja ravi lastel ja täiskasvanutel. Kitsas spetsialiseerumine - epilepsia kirurgiline ravi, epilepsia geneetika. Neurogeneetika.

Teaduslikud publikatsioonid

Sharkov A., Sharkova I., Golovteev A., Ugarov I. "Diferentsiaaldiagnostika optimeerimine ja geneetilise testimise tulemuste tõlgendamine XGenCloudi ekspertsüsteemiga teatud epilepsiavormide korral". Meditsiiniline geneetika, nr 4, 2015, lk. 41.
*
Sharkov A.A., Vorobjov A.N., Troitski A.A., Savkina I.S., Dorofejeva M.Yu., Melikyan A.G., Golovteev A.L. "Epilepsia operatsioon multifokaalsete ajukahjustuste korral tuberoosskleroosiga lastel." XIV Venemaa kongressi "INNOVATIIVSED TEHNOLOOGIAD LASTE- JA LASTEKIRURGIAS" kokkuvõtted. Vene perinatoloogia ja pediaatria bülletään, 4, 2015. - lk 226-227.
*
Dadali E.L., Belousova E.D., Sharkov A.A. "Molekulaargeneetilised lähenemisviisid monogeense idiopaatilise ja sümptomaatilise epilepsia diagnoosimiseks". XIV Venemaa kongressi "INNOVATIIVSED TEHNOLOOGIAD PEDIAATRIAS JA LASTEKIRURGIAS" kokkuvõte. Vene perinatoloogia ja pediaatria bülletään, 4, 2015. - lk 221.
*
Sharkov A.A., Dadali E.L., Sharkova I.V. "II tüüpi varajase epileptilise entsefalopaatia haruldane variant, mis on põhjustatud CDKL5 geeni mutatsioonidest meespatsiendil." Konverents "Epileptoloogia neuroteaduste süsteemis". Konverentsi materjalide kogumik: / Toimetanud: prof. Neznanova N.G., prof. Mihhailova V.A. Peterburi: 2015. - lk. 210-212.
*
Dadali E.L., Sharkov A.A., Kanivets I.V., Gundorova P., Fominykh V.V., Sharkova I.V. Troitski A.A., Golovtejev A.L., Poljakov A.V. KCTD7 geeni mutatsioonidest põhjustatud 3. tüüpi müokloonuse epilepsia uus alleelvariant // Meditsiiniline geneetika.-2015.- v.14.-№9.- lk.44-47
*
Dadali E.L., Sharkova I.V., Sharkov A.A., Akimova I.A. "Päriliku epilepsia diagnoosimise kliinilised ja geneetilised tunnused ning kaasaegsed meetodid". Materjalide kogumik "Molekulaarbioloogilised tehnoloogiad meditsiinipraktikas" / Toim. vastav liige RANEN A.B. Maslennikova.- Teema. 24.- Novosibirsk: Academizdat, 2016.- 262: lk. 52-63
*
Belousova E.D., Dorofeeva M.Yu., Sharkov A.A. Epilepsia tuberoosskleroosi korral. Raamatus "Ajuhaigused, meditsiinilised ja sotsiaalsed aspektid", toimetanud Gusev E.I., Gekht A.B., Moskva; 2016; lk.391-399
*
Dadali E.L., Sharkov A.A., Sharkova I.V., Kanivets I.V., Konovalov F.A., Akimova I.A. Pärilikud haigused ja sündroomid, millega kaasnevad palavikukrambid: kliinilised ja geneetilised omadused ning diagnostikameetodid. //Vene laste neuroloogia ajakiri.- T. 11.- nr 2, lk. 33-41. doi: 10.17650/ 2073-8803-2016-11-2-33-41
*
Sharkov A.A., Konovalov F.A., Sharkova I.V., Belousova E.D., Dadali E.L. Molekulaargeneetilised lähenemisviisid epilepsia entsefalopaatia diagnoosimiseks. Kokkuvõtete kogumik "VI BALTIC CONGRESS ON LASTE NEUROLOOGIA" / Toimetanud professor Guzeva V.I. Peterburi, 2016, lk. 391
*
Hemisferotoomia ravimiresistentse epilepsia korral kahepoolse ajukahjustusega lastel Zubkova N.S., Altunina G.E., Zemlyansky M.Yu., Troitsky A.A., Sharkov A.A., Golovteev A.L. Kokkuvõtete kogumik "VI BALTIC CONGRESS ON LASTE NEUROLOOGIA" / Toimetanud professor Guzeva V.I. Peterburi, 2016, lk. 157.
*
*
Artikkel: Varajase epilepsia entsefalopaatia geneetika ja diferentseeritud ravi. A.A. Sharkov*, I.V. Sharkova, E.D. Belousova, E.L. Dadali. Journal of Neurology and Psychiatry, 9, 2016; Probleem. 2doi:10.17116/jnevro20161169267-73
*
Golovteev A.L., Sharkov A.A., Troitsky A.A., Altunina G.E., Zemljanski M.Yu., Kopachev D.N., Dorofejeva M.Yu. "Epilepsia kirurgiline ravi tuberoosskleroosi korral", toimetanud Dorofeeva M.Yu., Moskva; 2017; lk.274
*
Epilepsiavastase rahvusvahelise liiga uued epilepsia ja epilepsiahoogude rahvusvahelised klassifikatsioonid. Journal of Neurology and Psychiatry. C.C. Korsakov. 2017. V. 117. Nr 7. S. 99-106

Juht
"Sünnieelne diagnoos"

Kiiev
Julia Kirillovna

2011. aastal lõpetas ta Moskva Riikliku Meditsiini- ja Stomatoloogiaülikooli. A.I. Evdokimova üldmeditsiini erialal Õppinud residentuuris sama ülikooli meditsiinigeneetika osakonnas geneetika erialal

2015. aastal läbis ta praktika sünnitusabi ja günekoloogia erialal föderaalse riigieelarvelise kutsekõrgkooli MGUPP meditsiinilise kraadiõppe meditsiiniinstituudis.

Alates 2013. aastast on ta läbi viinud konsultatiivseid kohtumisi pereplaneerimise ja paljunemise keskuses DZM.

Alates 2017. aastast on ta Genomedi labori sünnieelse diagnostika osakonna juhataja

Esitab regulaarselt ettekandeid konverentsidel ja seminaridel. Loeb loenguid erinevate erialade arstidele reproduktiiv- ja sünnieelse diagnostika valdkonnas

Viib läbi meditsiinilist geeninõustamist rasedatele sünnieelse diagnostika alal, et vältida kaasasündinud väärarengutega laste sündi, aga ka eeldatavalt pärilike või kaasasündinud patoloogiatega peredele. Viib läbi DNA diagnostika saadud tulemuste tõlgendamise.

SPETSIALISTID

Latypov
Artur Šamilevitš

Latypov Artur Šamilevitš – kõrgeima kvalifikatsioonikategooria arst geneetik.

Pärast Kaasani Riikliku Meditsiiniinstituudi arstiteaduskonna lõpetamist 1976. aastal töötas ta aastaid esmalt arstina meditsiinigeneetika kabinetis, seejärel Tatarstani Vabariikliku Haigla meditsiinigeneetikakeskuse juhatajana, meditsiinigeneetika peaspetsialistina. Tatarstani Vabariigi tervishoiuministeerium, Kaasani Meditsiiniülikooli osakondade õpetaja.

Rohkem kui 20 reproduktiiv- ja biokeemilise geneetika probleeme käsitleva teadusliku artikli autor, paljude kodumaiste ja rahvusvaheliste meditsiinigeneetika probleeme käsitlevate kongresside ja konverentside osavõtja. Ta tutvustas keskuse praktilisse töösse rasedate ja vastsündinute massilise pärilike haiguste sõeluuringu meetodeid, viis läbi tuhandeid invasiivseid protseduure loote pärilike haiguste kahtluse korral erinevates raseduse staadiumides.

Alates 2012. aastast töötab ta meditsiinigeneetika osakonnas sünnieelse diagnostika kursusega Venemaa kraadiõppeakadeemias.

Teadusvaldkonnad – laste ainevahetushaigused, sünnieelne diagnostika.

Vastuvõtuaeg: K 12-15, L 10-14

Arstid võetakse vastu kokkuleppel.

Geneetik

Gabelko
Deniss Igorevitš

2009. aastal lõpetas ta KSMU nimelise arstiteaduskonna. S. V. Kurashova (eriala "Meditsiin").

Praktika Peterburi Föderaalse Tervise ja Sotsiaalarengu Agentuuri kraadiõppe meditsiiniakadeemias (eriala "Geneetika").

Praktika teraapias. Esmane ümberõpe erialal "Ultraheli diagnostika". Alates 2016. aastast on ta Fundamentaalmeditsiini ja Bioloogia Instituudi kliinilise meditsiini aluste osakonna osakonna töötaja.

Erialased huvid: sünnieelne diagnostika, kaasaegsete sõeluuringute ja diagnostikameetodite kasutamine loote geneetilise patoloogia tuvastamiseks. Pärilike haiguste kordumise riski määramine perekonnas.

Geneetika ning sünnitusabi ja günekoloogia alaste teaduslike ja praktiliste konverentside osaleja.

Töökogemus 5 aastat.

Konsultatsioon kokkuleppel

Arstid võetakse vastu kokkuleppel.

Geneetik

Grishina
Christina Aleksandrovna

2015. aastal lõpetas ta Moskva Riikliku Meditsiini- ja Stomatoloogiaülikooli üldmeditsiini erialal. Samal aastal astus ta föderaalse riigieelarvelise teadusasutuse "Meditsiini-geeniuuringute keskus" residentuuriprogrammi erialal 30.08.30 "Geneetika".
Ta võeti 2015. aasta märtsis tööle kompleksselt pärilike haiguste molekulaargeneetika laboratooriumisse (juhataja – bioloogiateaduste doktor Karpukhin A.V.) labori assistendiks. Alates 2015. aasta septembrist on ta üle viidud teaduri ametikohale. Ta on enam kui 10 kliinilist geneetikat, onkogeneetikat ja molekulaaronkoloogiat käsitleva artikli ja kokkuvõtte autor ja kaasautor Venemaa ja välismaistes ajakirjades. Regulaarne meditsiinigeneetika konverentside osaleja.

Teaduslike ja praktiliste huvide valdkond: päriliku sündroomi ja multifaktoriaalse patoloogiaga patsientide meditsiiniline geneetiline nõustamine.

Konsultatsioon geneetikuga võimaldab teil vastata järgmistele küsimustele:

Kas lapse sümptomid on päriliku haiguse tunnused? milliseid uuringuid on vaja põhjuse tuvastamiseks täpse prognoosi määramine soovitused sünnieelse diagnoosi läbiviimiseks ja tulemuste hindamiseks kõik, mida pead teadma pereplaneerimisest IVF planeerimise konsultatsioon väli- ja veebikonsultatsioonid

võttis osa teaduslik-praktilisest koolist "Innovatiivsed geenitehnoloogiad arstidele: rakendamine kliinilises praktikas", Euroopa Inimgeneetika Ühingu (ESHG) konverentsist ja teistest inimgeneetikale pühendatud konverentsidest.

Viib läbi eeldatavalt pärilike või kaasasündinud patoloogiatega, sh monogeensete haiguste ja kromosoomianomaaliatega peredele meditsiinigeneetikanõustamist, määrab laboratoorsete geeniuuringute näidustused, tõlgendab DNA diagnostika tulemusi. Nõustab rasedaid sünnieelse diagnostika osas, et vältida kaasasündinud väärarengutega laste sündi.

Geneetik, sünnitusarst-günekoloog, meditsiiniteaduste kandidaat

Kudrjavtseva
Jelena Vladimirovna

Geneetik, sünnitusarst-günekoloog, meditsiiniteaduste kandidaat.

Reproduktiivnõustamise ja päriliku patoloogia valdkonna spetsialist.

Lõpetas 2005. aastal Uurali Riikliku Meditsiiniakadeemia.

Sünnitusabi ja günekoloogia residentuur

Praktika erialal "Geneetika"

Professionaalne ümberõpe erialal "Ultraheli diagnostika"

Tegevused:

• Viljatus ja raseduse katkemine
Vasilisa Jurievna



Ta on lõpetanud Nižni Novgorodi Riikliku Meditsiiniakadeemia arstiteaduskonna (eriala "Meditsiin"). Ta lõpetas FBGNU "MGNTS" kliinilise internatuuri kraadiga "geneetika". 2014. aastal läbis ta praktika emaduse ja lapsepõlve kliinikus (IRCCS materno infantile Burlo Garofolo, Trieste, Itaalia).

Alates 2016. aastast töötab ta Genomed LLC-s arsti konsultandina.

Osaleb regulaarselt geneetikaalastel teaduslikel ja praktilistel konverentsidel.

Põhitegevused: Konsulteerimine geneetiliste haiguste kliinilise ja laboratoorse diagnostika ning tulemuste tõlgendamise alal. Päriliku patoloogia kahtlusega patsientide ja nende perekondade ravi. Nõustamine raseduse planeerimisel, samuti raseduse ajal sünnieelse diagnoosimise küsimustes, et vältida kaasasündinud patoloogiaga laste sündi.

FISH-test on üks kaasaegsemaid meetodeid kromosoomikomplekti analüüsimiseks. Lühend “FISH” ise tekkis tehnika ingliskeelsest nimetusest – fluorescent in situ hybridization. See test võimaldab suure täpsusega uurida raku geneetilist materjali (sh spetsiifilisi geene ja nende segmente).

Seda meetodit kasutatakse praegu teatud tüüpi vähkkasvajate diagnoosimiseks, kuna raku pahaloomuline transformatsioon on tingitud muutustest selle genoomis. Seega, olles leidnud geenides iseloomulikud häired, võib selle raku suure kindlusega klassifitseerida vähkkasvajate hulka. Lisaks kasutatakse FISH-testi ka juba püstitatud diagnoosi kinnitamiseks, samuti täiendavate andmete saamiseks spetsiifiliste keemiaravi ravimite kasutamise võimalikkuse kohta rinnavähi keemiaravi eesmärgil ning haiguse prognoosi selgitamiseks.

Hea näide FISH-testi kasutamisest on rinnavähiga patsientidel. Selle tehnikaga uuritakse biopsiakudet geeni HER-2 koopiate suhtes. Kui see geen on olemas, tähendab see, et rakupinnal asub suur hulk HER2 retseptoreid. Nad on tundlikud signaalide suhtes, mis stimuleerivad kasvajaelementide arengut ja paljunemist. Sel juhul avaneb võimalus trastuzumabi efektiivseks kasutamiseks – see ravim blokeerib HER2 retseptorite aktiivsust, mis tähendab, et pärsib kasvaja kasvu.

Kuidas FISH-testi tehakse?

Uuringu käigus viiakse patsiendilt saadud biomaterjali sisse spetsiaalne fluorestseeruvaid märgiseid sisaldav värvaine. Nende keemiline struktuur on selline, et nad on võimelised seonduma eranditult raku kromosoomikomplekti täpselt määratletud piirkondadega. Seejärel asetatakse värvitud koeproov fluorestsentsmikroskoobi alla. Kui uurija tuvastab kromosoomide lõigud, millele on kinnitatud helendavad märgid, on see kõrvalekallete näitaja, mis viitab onkoloogilise tüübiga seotud muutuste olemasolule genoomis.

Neid kõrvalekaldeid kromosoomide struktuuris on mitut tüüpi:
translokatsioon - kromosomaalse materjali tüki liikumine uude kohta samas või teises kromosoomis;
inversioon - kromosoomi osa pööramine 1800 võrra ilma selle põhikehast eraldamata;
deletsioon – mis tahes kromosomaalse piirkonna kaotus;
dubleerimine - kromosoomi osa kopeerimine, mis viib rakus sisalduvate sama geeni koopiate arvu suurenemiseni.

Kõik need häired kannavad teatud diagnostilisi märke ja teavet. Näiteks võivad translokatsioonid viidata leukeemiate, lümfoomide või sarkoomide esinemisele ning geenide dubleerimise olemasolu aitab määrata kõige tõhusama ravi.

Mis on FISH-testi eelis?

Võrreldes traditsiooniliste rakkude geneetilise materjali analüüsidega, on FISH-test palju tundlikum. See võimaldab tuvastada isegi kõige ebaolulisemaid muutusi genoomis, mida teiste meetoditega ei ole võimalik tuvastada.

Teine FISH-testi eelis on see, et seda saab kasutada hiljuti patsiendilt saadud materjali puhul. Standardse tsütogeneetilise analüüsi jaoks on vaja esmalt kasvatada rakukultuur, st lasta patsiendi rakkudel laboris paljuneda. See protsess võtab aega umbes 2 nädalat ja rutiinse uuringu läbiviimiseks kulub veel nädal, samas kui FISH-testi tulemus saadakse vaid mõne päeva pärast.

Arstiteaduse järjekindel areng toob järk-järgult kaasa FISH-testi maksumuse vähenemise ja selle üha laiema kasutuselevõtu onkoloogide igapäevapraktikas.

Kuna FISH-testiga saab tuvastada vähktõbe põhjustavaid geneetilisi kõrvalekaldeid, on see tõhus meetod teatud tüüpi vähi diagnoosimiseks. Testi kasutatakse ka diagnoosi kinnitamiseks ning see annab lisateavet haiguse võimaliku tulemuse ja keemiaravi otstarbekuse kohta.

Näiteks rinnavähiga patsientidel aitab biopsia käigus võetud koe FISH-test määrata HER2 geeni koopiate olemasolu rakkudes.

HER2 geeni koopiatega rakkudel on rohkem HER2 retseptoreid, mis võtavad vastu signaale, mis stimuleerivad rinnavähirakkude kasvu. Seetõttu on HER2 geeni koopiatega patsientidel soovitatav kasutada Herceptini (trastuzumab) – ravimit, mis pärsib HER2 retseptorite võimet signaale vastu võtta.

FISH-testi kalli hinna ja suhtelise ligipääsmatuse tõttu kasutatakse sagedamini teist rinnavähi tuvastamise testi, immunohistokeemiat (IHC).

Meditsiiniringkondades on vaidlusi FISH-testi kõrge jõudluse üle standardtestidega võrreldes. Kuid tänu tehnoloogilistele edusammudele muutub FISH-test üha odavamaks ja erinevates kliinilistes tingimustes kättesaadavamaks.

Kuidas FISH-test töötab

FISH-testi läbiviimisel patsiendi koeprooviga kasutatakse fluorestseeruvaid märgiseid, mis seonduvad ainult teatud kromosoomide piirkondadega. Seejärel tehakse fluorestsentsmikroskoobi abil kindlaks kromosoomide piirkonnad, millega fluorestseeruvad sondid on kokku puutunud, ja võimalike kõrvalekallete olemasolu, mis provotseerivad vähi arengut.

Vähirakkudel võivad ilmneda järgmised kõrvalekalded:

• translokatsioon - kromosoomi lõigu ülekandmine uude asukohta samas või teises kromosoomis;
• inversioon - kromosoomi lõigu pööre 180 kraadi võrra, säilitades samal ajal ühenduse kromosoomi endaga;
• deletsioon - kromosoomi osa kadumine;
• dubleerimine - kromosoomi lõigu kahekordistumine, mis põhjustab rakus geenikoopiate liigset sisaldust.

Translokatsioonid aitavad diagnoosida teatud tüüpi leukeemiat, lümfoomi ja sarkoomi. Rinnavähirakkude dubleerimise olemasolu aitab arstil valida parima ravi.

FISH-testi eelis standardsete tsütogeneetiliste testide ees (mis uurib rakkude geneetilist koostist) seisneb selles, et see suudab tuvastada ka kõige väiksemaid geneetilisi muutusi, mida tavapärase mikroskoobiga ei näe.

Teine oluline FISH-testi omadus on see, et seda saab teha rakkudega, mis pole veel aktiivselt arenema hakanud. Muud testid tehakse rakkudega alles pärast seda, kui neid on kaks nädalat laboris kasvatatud, nii et kogu protsess võib kesta kuni kolm nädalat, FISH-testi tulemused on saadaval mõne päeva jooksul.

Näited FISH-testist vähi diagnoosimiseks

Kuigi FISH-testi kasutatakse kõige sagedamini rinnavähi geneetiliste kõrvalekallete analüüsimiseks, annab see olulist teavet ka teiste vähitüüpide kohta.

Näiteks põievähi diagnoosimisel on FISH-test uriinirakkude jaoks täpsem kui ebatüüpiliste rakkude testid. Lisaks võimaldab see määrata põievähi kordumise 3-6 kuud varem.

FISH-test aitab tuvastada ka leukeemia kromosomaalseid kõrvalekaldeid, sealhulgas rakke, mis viitavad kroonilise lümfotsütaarse leukeemia (CLL) agressiivsele vormile. KLL-i agressiivse vormiga patsiendid võivad vajada kiiret ravi, vähem agressiivsete vormide puhul võib piisata vaatlusest.

FISH-testi poleemika

Mitte kõik eksperdid ei nõustu sellega, et FISH-test on Herceptinile tundlike vähivormide diagnoosimiseks kõige täpsem test.

2010. aastal väitsid Mayo Instituudi (Iirimaa) teadlased, et odavam IHC-test on Herceptini suhtes tundlikkuse määramisel peaaegu sama tõhus kui FISH-test.

Teised eksperdid on FISH-testi kritiseerinud väikeste mutatsioonide (nt väikesed deletsioonid, insertsioonid ja punktmutatsioonid) tuvastamise ning mõningate inversioonide ignoreerimise pärast.

FISH-testi täiustamine

Vaatamata sellele, et FISH-testitehnoloogia ei võimalda veel analüüsida kromosoomide kõiki osi, areneb see selles suunas pidevalt.

Näiteks 2007. aastal teatasid Kanada teadlased mikroskoobi slaidisuuruse kiibi väljatöötamisest, mis võimaldaks teha FISH-testi, kasutades selleks seadet, mis mahub peopessa.

See täiustatud test, mida nimetatakse FISH-testiks kiibil, annab tulemused ühe päevaga ja maksab vähem kui teised testid.